| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| ·大肠杆菌的病原学 | 第11-12页 |
| ·大肠杆菌的流行病学及致病机制 | 第12-14页 |
| ·流行病学 | 第12-13页 |
| ·UPEC的致病机制 | 第13-14页 |
| ·NMEC的致病机制 | 第14页 |
| ·ExPEC毒力因子的概述 | 第14-18页 |
| ·黏附素 | 第15-17页 |
| ·毒素 | 第17-18页 |
| ·铁摄取系统 | 第18页 |
| ·细菌荚膜多糖的概述 | 第18-21页 |
| 2 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 3 材料与方法 | 第22-40页 |
| ·材料 | 第22-27页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第22-24页 |
| ·动物和细胞 | 第24页 |
| ·主要药品、试剂、试剂盒与仪器 | 第24-25页 |
| ·主要培养基及抗生素配制 | 第25-26页 |
| ·主要溶液配制 | 第26-27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-40页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·猪肠外致病性大肠杆菌的复苏增殖及基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·PCR扩增 | 第29页 |
| ·DNA的纯化与回收 | 第29页 |
| ·DNA与载体的连接反应 | 第29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29-30页 |
| ·质粒的小量制备(碱裂解法) | 第30-31页 |
| ·PCN033菌株kpsM基因前后臂片段的克隆与鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组自杀性质粒pREAkpsM的构建 | 第32-33页 |
| ·接合转移与猪肠外致病性大肠杆菌基因缺失株的构建 | 第33-35页 |
| ·Southern blot | 第35-36页 |
| ·猪肠外致病性大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·猪肠外致病性大肠杆菌的电转化 | 第36-37页 |
| ·缺失菌株生长特性的研究 | 第37页 |
| ·缺失菌株对小鼠的毒力试验及LD_(50)的测定 | 第37页 |
| ·细胞感染试验 | 第37-38页 |
| ·细胞吞噬试验 | 第38页 |
| ·血清杀菌试验 | 第38-39页 |
| ·透射电镜观察试验 | 第39-40页 |
| 4 结果与分析 | 第40-50页 |
| ·kpsM基因生物信息学相关分析 | 第40-41页 |
| ·重组转移质粒pRE112ΔkpsM的构建与鉴定 | 第41-42页 |
| ·基因缺失突变株的筛选与鉴定 | 第42-43页 |
| ·Southern blot验证基因缺失突变株构建成功 | 第43-44页 |
| ·△kpsM互补菌株△kpsM-kpsM的构建与鉴定 | 第44-45页 |
| ·基因缺失突变株生物学特性分析 | 第45-46页 |
| ·遗传稳定性分析 | 第45-46页 |
| ·生长特性分析 | 第46页 |
| ·小鼠的感染试验及LD_(50)的测定 | 第46-47页 |
| ·细胞黏附试验 | 第47页 |
| ·细胞吞噬试验 | 第47-48页 |
| ·血清杀菌试验 | 第48-49页 |
| ·透射电镜试验 | 第49-50页 |
| 5 讨论 | 第50-52页 |
| ·kpsM基因的选定 | 第50页 |
| ·基因缺失突变株的构建 | 第50-51页 |
| ·透射电镜的观察结果 | 第51页 |
| ·kpsM基因对PCN033毒力的影响 | 第51-52页 |
| 6 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
