印度酸橘CrNCED1启动子克隆及胁迫响应分析
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-23页 |
| ·课题的提出 | 第9-10页 |
| ·前人研究进展 | 第10-22页 |
| ·ABA的发现及其在逆境中的主要生理作用 | 第10-11页 |
| ·ABA调控渗透胁迫的主要机制 | 第11-13页 |
| ·ABA的合成及其过程中的限速酶 | 第13-15页 |
| ·启动子结构概述 | 第15-18页 |
| ·启动子的分类 | 第18-22页 |
| ·本课题研究内容 | 第22-23页 |
| 2. 材料与方法 | 第23-40页 |
| ·材料与试剂 | 第23-24页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·载体和菌株 | 第23页 |
| ·试剂盒及酶 | 第23-24页 |
| ·启动子全长的克隆及分析 | 第24-28页 |
| ·CrNCED1启动子的引物设计 | 第24页 |
| ·CTAB大量法提取植物基因组DNA | 第24-25页 |
| ·CrNCED1启动子的扩增 | 第25页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳及目的片段的回收 | 第25-26页 |
| ·目的片段与T载体的连接 | 第26页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌及阳性克隆鉴定 | 第26-28页 |
| ·启动子全长序列获得及其生物信息学分析 | 第28页 |
| ·基因上游元件密集区的启动子克隆及分析 | 第28-33页 |
| ·N_1启动子克隆片段的引物设计 | 第28页 |
| ·N_1启动子克隆片段T载体的构建 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第29页 |
| ·质粒的酶切及检测 | 第29-30页 |
| ·酶切产物的回收 | 第30-31页 |
| ·表达载体的连接 | 第31页 |
| ·连接产物转化农杆菌及阳性克隆鉴定 | 第31-33页 |
| ·烟草叶片的农杆菌转化及植株再生 | 第33-34页 |
| ·烟草种子灭菌及播种 | 第33页 |
| ·烟草叶片的农杆菌转化 | 第33-34页 |
| ·T_0代烟草的鉴定 | 第34-36页 |
| ·小样法提取烟草DNA | 第34-35页 |
| ·转基因烟草的PCR鉴定 | 第35页 |
| ·Trizol试剂盒法提取烟草RNA | 第35-36页 |
| ·RNA的反转录 | 第36页 |
| ·转基因烟草的组织化学染色 | 第36-38页 |
| ·烟草组织化学染色GUS染液的配置 | 第36-37页 |
| ·烟草组织化学染色 | 第37页 |
| ·组织化学染色结果的观察 | 第37-38页 |
| ·烟草的胁迫处理及染色 | 第38页 |
| ·烟草GUS活性的荧光定量分析及总蛋白的测定 | 第38-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-48页 |
| ·同源序列法扩增印度酸橘CrNCED1启动子 | 第40页 |
| ·启动子全长片段的生物信息学分析 | 第40-43页 |
| ·N_1双元表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·烟草转基因植株鉴定 | 第44-45页 |
| ·T_0代烟草的组织特异性分析 | 第45页 |
| ·T_1代烟草的抗逆性分析 | 第45-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| ·启动子转基因植株鉴定方法探讨 | 第48页 |
| ·启动子启动基因的组织特异性分析 | 第48-49页 |
| ·启动子的抗逆性分析 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 图版及说明 | 第58-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
