| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-26页 |
| ·纤维素 | 第13-15页 |
| ·纤维素酶 | 第15-21页 |
| ·纤维素酶的分布 | 第15-16页 |
| ·纤维素酶的组成和多样性 | 第16-17页 |
| ·纤维素酶的分类 | 第17-18页 |
| ·游离型纤维素酶的结构 | 第18-19页 |
| ·纤维小体的结构 | 第19-20页 |
| ·纤维素的酶解机理 | 第20-21页 |
| ·碱性纤维素酶 | 第21-24页 |
| ·研究现状 | 第21-23页 |
| ·碱性纤维素酶的应用 | 第23-24页 |
| ·选题目的和意义 | 第24-25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-41页 |
| ·材料 | 第26-28页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·主要试剂和酶 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·培养基、抗生素和常规药品试剂的配制 | 第27-28页 |
| ·方法与步骤 | 第28-41页 |
| ·筛选菌种 | 第28-29页 |
| ·菌种的保存 | 第29页 |
| ·菌种活化 | 第29页 |
| ·酶活力测定方法 | 第29-30页 |
| ·葡萄糖标准曲线的测定 | 第30页 |
| ·产羧甲基纤维素酶细菌基因组的提取 | 第30-31页 |
| ·菌种鉴定 | 第31-32页 |
| ·生长曲线的测定 | 第32页 |
| ·产酶培养基的筛选与优化 | 第32页 |
| ·产酶发酵条件的优化 | 第32-33页 |
| ·产酶曲线的测定 | 第33页 |
| ·发酵液的酶学性质分析 | 第33-34页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第34-35页 |
| ·酶的纯化 | 第35-36页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳与酶谱分析 | 第36页 |
| ·碱性纤维素酶酶学性质研究 | 第36页 |
| ·扩增碱性纤维素酶基因的引物设计 | 第36-38页 |
| ·分析获得基因片段 | 第38-40页 |
| ·表达载体的构建 | 第40页 |
| ·工程菌的诱导表达 | 第40页 |
| ·反向引物的设计 | 第40-41页 |
| 第三章 结果与分析 | 第41-76页 |
| ·目的菌种的鉴定 | 第41-48页 |
| ·产碱性纤维素酶细菌的筛选结果 | 第41-46页 |
| ·C73的形态特征 | 第46-47页 |
| ·C73菌株的系统发育分析 | 第47-48页 |
| ·C73菌株生长曲线的测定 | 第48-49页 |
| ·产酶培养基的确定 | 第49-53页 |
| ·不同碳源对发酵产酶的影响 | 第49页 |
| ·不同氮源对发酵产酶的影响 | 第49-50页 |
| ·酵母膏与蛋白胨对发酵的影响 | 第50-51页 |
| ·不同浓度NaCl发酵结果 | 第51-53页 |
| ·发酵产酶条件的优化结果 | 第53-60页 |
| ·温度对发酵产酶的影响 | 第53页 |
| ·转速对发酵产酶的影响 | 第53-54页 |
| ·接种量对发酵产酶的影响 | 第54-55页 |
| ·发酵液初始pH对发酵产酶的影响 | 第55页 |
| ·产酶发酵条件响应面优化 | 第55-60页 |
| ·产酶曲线 | 第60-61页 |
| ·发酵液的酶学性质分析 | 第61-64页 |
| ·最适反应温度和热稳定性 | 第61-62页 |
| ·酶反应最适pH和pH稳定性 | 第62-63页 |
| ·离子及EDTA对酶的影响 | 第63-64页 |
| ·酶的纯化 | 第64-65页 |
| ·酶的SDS-PAGE分析和酶谱分析 | 第65-66页 |
| ·纯酶与发酵液酶学性质比较分析 | 第66-70页 |
| ·最适反应温度和热稳定性比较分析 | 第66-67页 |
| ·最适反应pH比较分析 | 第67-68页 |
| ·离子影响 | 第68-69页 |
| ·Km值和最大反应速度(V_(max))测定 | 第69-70页 |
| ·C73相关产酶基因研究结果 | 第70-74页 |
| ·糖基结合元件(CBM)保守结构域设计引物扩增结果 | 第70-71页 |
| ·CMC酶基因保守序列设计引物扩增结果 | 第71页 |
| ·同源模式菌株CMC酶基因保守序列设计引物扩增结果 | 第71-72页 |
| ·同源的菌株CMC酶基因保守序列设计引物扩增结果 | 第72-73页 |
| ·CODEHOP在线分析程序化软件设计引物扩增结果 | 第73-74页 |
| ·载体的构建与表达 | 第74-76页 |
| 第四章 讨论 | 第76-78页 |
| 第五章 结论与展望 | 第78-80页 |
| ·结论 | 第78-79页 |
| ·展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-87页 |
| 附录 | 第87-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
