| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-17页 |
| ·3α羟类固醇脱氢酶 (3αHSD)的基本特性 | 第8-11页 |
| ·3αHSD 的来源及分类 | 第8页 |
| ·3αHSD 催化的反应 | 第8-9页 |
| ·3αHSD 的结构 | 第9-11页 |
| ·3αHSD 的研究进展 | 第11-13页 |
| ·相关的分子生物学基础研究 | 第11-12页 |
| ·纯化及性质研究 | 第12-13页 |
| ·3αHSD 的应用 | 第13-15页 |
| ·3αHSD 的生物学作用 | 第13页 |
| ·3αHSD 在血清检测中的应用 | 第13-15页 |
| ·立题背景及本文的主要研究内容 | 第15-17页 |
| ·研究意义 | 第15-16页 |
| ·主要研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-26页 |
| ·材料与设备 | 第17-19页 |
| ·菌株和质粒 | 第17页 |
| ·工具酶及分子量参照物 | 第17-18页 |
| ·引物 | 第18页 |
| ·实验仪器 | 第18页 |
| ·相关实验试剂的制备 | 第18-19页 |
| ·3αHSD 基因密码子的优化策略与工程菌的构建方法 | 第19-20页 |
| ·3αHSD 基因的密码子优化策略 | 第19页 |
| ·3αHSD 基因的扩增验证及目的片段回收 | 第19页 |
| ·重组粒的构建 | 第19-20页 |
| ·E.coli 的转化及转化子的筛选 | 第20页 |
| ·诱导重组3αHSD 表达的基本方法 | 第20-23页 |
| ·重组菌诱导后生长特性测定 | 第20-21页 |
| ·菌体浓度的计算 | 第21页 |
| ·最适乳糖诱导时间的确定 | 第21-22页 |
| ·重组酶的活性测定 | 第22页 |
| ·蛋白含量测定 | 第22页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第22-23页 |
| ·重组 3αHSD 的纯化及初步研究底物亲和纯化方法 | 第23-25页 |
| ·利用 Ni-NTA 纯化 3αHSD | 第23页 |
| ·底物固定化亲和介质的制备及分析方法 | 第23-24页 |
| ·最佳洗脱条件的探索方法 | 第24-25页 |
| ·底物固定化亲和介质对 3α-HSD 的纯化 | 第25页 |
| ·重组 3αHSD 的性质研究方法 | 第25-26页 |
| ·3αHSD 的最适温度与温度稳定性 | 第25页 |
| ·3αHSD 的最适 pH 与 pH 稳定性 | 第25页 |
| ·以脱氧胆酸为底物的定量分析方法 | 第25页 |
| ·金属离子对重组 3αHSD 影响的研究方法 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-45页 |
| ·3αHSD 基因设计优化与克隆 | 第26-29页 |
| ·3αHSD 基因的密码子优化 | 第26-28页 |
| ·全合成基因的扩增及片段回收 | 第28页 |
| ·重组质粒的构建 | 第28页 |
| ·E.coli 的转化及转化子的筛选 | 第28-29页 |
| ·3αHSD 诱导条件探索与高效表达 | 第29-35页 |
| ·IPTG 与乳糖诱导 3αHSD 表达的比较 | 第29-30页 |
| ·接种量及最佳诱导起始生物量的确定 | 第30-32页 |
| ·乳糖诱导剂浓度优化 | 第32-33页 |
| ·7.5 L 发酵罐中诱导时长优化 | 第33-35页 |
| ·亲和介质合成与亲和纯化 | 第35-40页 |
| ·Ni-NTA 纯化 3αHSDhis | 第35-36页 |
| ·底物固定化亲和介质的制备及分析 | 第36-38页 |
| ·底物固定化亲和介质纯化 3αHSD | 第38-40页 |
| ·重组 3αHSD 酶学基本性质研究 | 第40-45页 |
| ·3αHSD 的最适温度与温度稳定性 | 第40-41页 |
| ·3αHSD 的最适 pH 与 pH 稳定性 | 第41-43页 |
| ·以脱氧胆酸为底物的定量分析 | 第43页 |
| ·金属离子对重组 3αHSD 的影响 | 第43-45页 |
| 主要结论与展望 | 第45-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录一 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53-54页 |
| 附录二 缩略词表 | 第54页 |