| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-14页 |
| ·酰胺酶概述 | 第9-10页 |
| ·酰胺酶的来源、分类及应用 | 第9-10页 |
| ·聚酰胺酶的研究进展 | 第10页 |
| ·PA纤维的改性方法 | 第10-12页 |
| ·物理表面改性 | 第11页 |
| ·化学表面改性 | 第11页 |
| ·生物酶表面改性 | 第11-12页 |
| ·本课题的主要研究目的和意义 | 第12页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第12-14页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第14-25页 |
| ·材料 | 第14-15页 |
| ·菌种与质粒 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14页 |
| ·主要仪器 | 第14-15页 |
| ·培养基 | 第15页 |
| ·方法 | 第15-20页 |
| ·己二酸二己基酰胺的合成 | 第15页 |
| ·N.farcinica和C.nitrilophilus的培养 | 第15-16页 |
| ·PA纤维表面改性处理 | 第16页 |
| ·PA纤维的预处理 | 第16页 |
| ·PA纤维的酶处理、碱处理、灭活酶处理 | 第16页 |
| ·PA纤维的后处理 | 第16页 |
| ·Nocarida farcinica总DNA的提取 | 第16页 |
| ·聚酰胺酶基因的PCR扩增 | 第16-17页 |
| ·琼脂糖凝胶核酸电泳 | 第17页 |
| ·胶回收PCR产物 | 第17页 |
| ·E.coli感受态细胞的制备 | 第17-18页 |
| ·E.coli感受态细胞的热激转化 | 第18页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第18-19页 |
| ·目的基因与表达载体的连接 | 第19页 |
| ·聚酰胺酶基因的诱导表达 | 第19页 |
| ·聚酰胺酶的定点突变 | 第19-20页 |
| ·重组菌pT7-7-AMID-BL21(DE3)的培养与表达 | 第20页 |
| ·分析方法 | 第20-25页 |
| ·E.coli生长量的测定 | 第20页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第20页 |
| ·酰胺酶酶活的测定 | 第20-21页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第20-21页 |
| ·重组聚酰胺酶酶活的测定 | 第21页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析 | 第21页 |
| ·重组聚酰胺酶的纯化 | 第21-22页 |
| ·聚酰胺酶的最适温度和热稳定性分析 | 第22页 |
| ·聚酰胺酶的最适pH和pH稳定性分析 | 第22页 |
| ·金属离子对重组聚酰胺酶酶活的影响 | 第22页 |
| ·聚酰胺酶底物特异性分析 | 第22-23页 |
| ·重组聚酰胺酶的动力学分析 | 第23页 |
| ·PA酶处理最优条件的研究 | 第23页 |
| ·PA水解产物的检测 | 第23-24页 |
| ·PA处理液的浓缩 | 第24页 |
| ·水解产物的检测 | 第24页 |
| ·PA酶改性效果的测定 | 第24页 |
| ·聚酰胺酶空间结构模拟及分析 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-43页 |
| ·聚酰胺酶对PA纤维的改性效果的初步确定 | 第25-26页 |
| ·polyamidase和Cnamidase的制备 | 第25页 |
| ·PA改性效果分析 | 第25-26页 |
| ·聚酰胺酶在E.coli中的克隆表达 | 第26-29页 |
| ·N.farcinica基因组DNA的提取 | 第26页 |
| ·N.farcinica聚酰胺酶基因的克隆表达 | 第26-29页 |
| ·聚酰胺酶基因的诱导表达 | 第29页 |
| ·重组聚酰胺酶酶学性质研究 | 第29-34页 |
| ·重组聚酰胺酶的纯化 | 第30页 |
| ·重组聚酰胺酶的最适温度及其稳定性 | 第30-31页 |
| ·重组聚酰胺酶的最适pH及其稳定性 | 第31-32页 |
| ·金属离子对聚酰胺酶酶活的影响 | 第32-33页 |
| ·重组聚酰胺酶的底物特异性分析 | 第33-34页 |
| ·重组聚酰胺酶的动力学分析 | 第34页 |
| ·重组聚酰胺酶对PA表面改性效果的研究 | 第34-41页 |
| ·重组聚酰胺酶对PA改性效果及水解产物分析 | 第34-36页 |
| ·S173A突变体的克隆表达 | 第34页 |
| ·不同改性处理对PA改性效果分析 | 第34-36页 |
| ·HPLC检测PA的水解液 | 第36页 |
| ·PA表面酶改性最优条件的确定 | 第36-39页 |
| ·温度对PA酶改性效果的影响 | 第36-37页 |
| ·pH对PA酶改性效果的影响 | 第37-38页 |
| ·酶处理时间对PA酶改性效果的影响 | 第38页 |
| ·摇床转速对PA酶改性效果的影响 | 第38-39页 |
| ·聚酰胺酶水解PA的机制探索 | 第39-41页 |
| ·提高重组酰胺酶可溶性表达的探索 | 第41-43页 |
| 第四章 结论与展望 | 第43-45页 |
| ·结论 | 第43-44页 |
| ·展望 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第51页 |
