| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-16页 |
| 上篇 文献综述 | 第16-71页 |
| 第一章 植物病原线虫寄生相关基因分离与鉴定的方法 | 第17-25页 |
| 1 线虫分泌蛋白的研究 | 第17-19页 |
| ·免疫亲和纯化 | 第17-18页 |
| ·直接纯化分泌物 | 第18-19页 |
| 2 线虫基因转录水平的研究 | 第19-25页 |
| ·EST分析 | 第19页 |
| ·酵母信号肽筛选 | 第19-20页 |
| ·RNA指纹技术 | 第20页 |
| ·cDNA扩增片段长度多态性 | 第20-21页 |
| ·示差筛选 | 第21页 |
| ·抑制性差减杂交 | 第21-22页 |
| ·固相差减杂交 | 第22页 |
| ·代表性差异显示 | 第22-24页 |
| ·基因表达图谱 | 第24-25页 |
| 第二章 植物寄生线虫寄生相关基因功能的分析方法 | 第25-31页 |
| 1 致病相关基因的表达图谱 | 第25-26页 |
| 2 寄生蛋白在植物组织中的定位 | 第26-27页 |
| 3 寄生蛋白在植物组织的亚细胞定位 | 第27-28页 |
| 4 寻找互作蛋白 | 第28页 |
| 5 突变互补 | 第28-29页 |
| 6 在植物中表达线虫寄生相关基因 | 第29页 |
| 7 基因沉默 | 第29-31页 |
| 第三章 植物寄生线虫与寄主植物互作的分子机理 | 第31-41页 |
| 1 抵御寄主防卫反应 | 第32-33页 |
| ·过氧化物酶 | 第32页 |
| ·FAR | 第32-33页 |
| 2 协助线虫侵染及移动 | 第33-35页 |
| ·纤维素酶 | 第33页 |
| ·果胶裂解酶 | 第33-34页 |
| ·纤维素结合蛋白 | 第34-35页 |
| ·扩展蛋白 | 第35页 |
| 3 取食结构(巨细胞/合胞体)的诱导及维持 | 第35-39页 |
| ·分支酸变位酶 | 第36-38页 |
| ·小分子多肽 | 第38-39页 |
| ·泛素蛋白 | 第39页 |
| 4 其它寄生相关蛋白 | 第39-41页 |
| ·几丁质酶 | 第39-40页 |
| ·类毒液过敏原蛋白 | 第40页 |
| ·14-3-3蛋白 | 第40-41页 |
| 第四章 植物寄生线虫RNAi的研究进展 | 第41-53页 |
| 1 RNAi(RNA interference)简史 | 第41页 |
| 2 RNAi作用机制 | 第41-43页 |
| 3 线虫中RNAi机制的特点 | 第43-44页 |
| 4 植物寄生线虫中的RNA干涉 | 第44-51页 |
| ·活体外(in vitro)条件下dsRNA的递送 | 第44-46页 |
| ·影响RNAi效果的条件 | 第46-47页 |
| ·RNAi诱导的基因沉默持效期 | 第47页 |
| ·植物组织内(in vivo)RNA干涉线虫寄生基因 | 第47-49页 |
| ·dsRNA分子进入线虫体内 | 第49-50页 |
| ·植物寄生线虫RNAi表型鉴定 | 第50-51页 |
| 5 基于RNAi的根结线虫防治的前景 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-71页 |
| 下篇 研究内容 | 第71-170页 |
| 第一章 代表性差异显示法分离南方根结线虫寄生相关基因 | 第72-100页 |
| 摘要 | 第72页 |
| ABSTRACT | 第72-74页 |
| 1 材料与方法 | 第74-90页 |
| ·线虫的培养 | 第74页 |
| ·寄生早期二龄幼虫及寄生期幼虫的分离与收集 | 第74页 |
| ·核酸的提取及cDNA的合成 | 第74-77页 |
| ·RDA | 第77-87页 |
| ·差异表达的cDNA片段的克隆、测序 | 第87-89页 |
| ·RT-PCR验证获得的cDNA片段的差异表达性 | 第89-90页 |
| 2 结果 | 第90-96页 |
| ·样本RNA的提取及cDNA的合成 | 第90-91页 |
| ·RDA富集效果 | 第91页 |
| ·检测差减杂交的效率及灵敏度 | 第91-92页 |
| ·富集片段的克隆和测序 | 第92-93页 |
| ·RT-PCR进一步筛选验证差异表达的cDNA片段及其序列分析 | 第93-96页 |
| 3 讨论 | 第96-100页 |
| 第二章 南方根结线虫类毒液过敏原基因的克隆与分析 | 第100-122页 |
| 摘要 | 第100页 |
| ABSTRACT | 第100-101页 |
| 1 材料与方法 | 第101-112页 |
| ·线虫的培养及分离 | 第101-102页 |
| ·寄生前及寄生后不同阶段线虫的分离与收集 | 第102页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第102-103页 |
| ·总RNA的提取及mRNA的分离 | 第103页 |
| ·RACE获取全长cDNA | 第103-106页 |
| ·目标片段的克隆 | 第106页 |
| ·测序及序列拼接 | 第106页 |
| ·类毒液过敏原蛋白cDNA序列的生物信息学分析 | 第106-107页 |
| ·原位杂交分析 | 第107-109页 |
| ·南方根结线虫类毒液过敏原基因的发育表达模式 | 第109页 |
| ·类毒液过敏原蛋白gDNA序列的获取 | 第109-110页 |
| ·Southern blot | 第110-112页 |
| 2 结果 | 第112-119页 |
| ·南方根结线虫类毒液过敏原基因全长cDNA | 第112-113页 |
| ·类毒液过敏原蛋白基因在基因组中的序列结构 | 第113-114页 |
| ·类毒液过敏原蛋白基因Southern blot | 第114页 |
| ·类毒液过敏原氨基酸序列的分析与比对 | 第114-118页 |
| ·南方根结线虫类毒液过敏原基因的发育表达模式 | 第118-119页 |
| ·类毒液过敏原蛋白的组织定位 | 第119页 |
| 3 讨论 | 第119-122页 |
| 第三章 南方根结线虫类毒液过敏原基因活体外RNA干涉的研究 | 第122-138页 |
| 摘要 | 第122页 |
| ABSTRACT | 第122-124页 |
| 1 材料与方法 | 第124-128页 |
| ·主要试剂 | 第124页 |
| ·线虫的培养及二龄幼虫的分离与收集 | 第124页 |
| ·活体外刺激线虫吞咽效果比较 | 第124-125页 |
| ·活体外刺激条件的优化 | 第125页 |
| ·活体外刺激浸泡/活体外RNA干涉 | 第125-128页 |
| 2 结果 | 第128-135页 |
| ·章鱼胺对南方根结线虫的刺激效果 | 第128-129页 |
| ·间苯二酚对南方根结线虫的刺激效果 | 第129-130页 |
| ·根结线虫活体外RNA干涉的条件优化 | 第130-132页 |
| ·Mi-vap-2活体外RNAi | 第132页 |
| ·活体外RNA干涉后Mi-vap-2转录水平的检测 | 第132-134页 |
| ·接种实验 | 第134-135页 |
| 3 讨论 | 第135-138页 |
| 第四章 南方根结线虫类毒液过敏原基因的活体内RNA干涉研究 | 第138-160页 |
| 摘要 | 第138页 |
| ABSTRACT | 第138-139页 |
| 1 材料与方法 | 第139-150页 |
| ·微生物和植物材料 | 第139-140页 |
| ·线虫的培养、分离与收集 | 第140页 |
| ·核酸的提取及cDNA的合成 | 第140页 |
| ·dsRNA表达载体的构建 | 第140-145页 |
| ·pART27-VAP-F-R转化农杆菌 | 第145-146页 |
| ·转基因烟草的产生 | 第146-147页 |
| ·转基因烟草的检测 | 第147-150页 |
| ·转基因烟草接种实验 | 第150页 |
| 2 结果 | 第150-155页 |
| ·dsRNA表达载体的构建 | 第150-153页 |
| ·转基因烟草的获得和鉴定 | 第153-155页 |
| ·转基因烟草接种实验 | 第155页 |
| 3 讨论 | 第155-160页 |
| 参考文献 | 第160-170页 |
| 附录 | 第170-179页 |
| 附录一 培养基及相关试剂 | 第171-175页 |
| 附录二 各章中用到的引物或寡聚核苷酸序列 | 第175-177页 |
| 附录三： dsRNA表达载体pART27-VAP-F-R的构建图 | 第177-179页 |
| 攻读博士学位期间发表的研究论文 | 第179-181页 |
| 致谢 | 第181页 |
