| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| ·宏基因组研究方法及进展 | 第11-19页 |
| ·宏基因组的定义 | 第11-12页 |
| ·宏基因组提取与纯化 | 第12页 |
| ·宏基因组文库的载体 | 第12-13页 |
| ·宏基因组文库的宿主 | 第13页 |
| ·宏基因组文库的筛选 | 第13-19页 |
| ·基于功能的筛选 | 第14-16页 |
| ·基于序列的筛选 | 第16-18页 |
| ·底物诱导基因表达筛选法 | 第18-19页 |
| ·微生物酯酶的分类及应用 | 第19-23页 |
| ·微生物酯酶与脂肪酶分类 | 第19-21页 |
| ·真正的脂肪酶(FamilyⅠ) | 第19-20页 |
| ·酯酶(FamiliesⅡ-Ⅷ) | 第20-21页 |
| ·酯酶的应用 | 第21-23页 |
| ·制药工业 | 第21-22页 |
| ·食品加工 | 第22页 |
| ·环境保护 | 第22页 |
| ·制浆造纸、纺织品、皮革处理以及烘焙工业 | 第22页 |
| ·洗涤添加剂方面 | 第22-23页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| ·本课题研究的技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第25-39页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-29页 |
| ·土壤宏基因组文库构建及评价 | 第26-27页 |
| ·土壤DNA提取 | 第26页 |
| ·土壤DNA纯化 | 第26-27页 |
| ·土壤DNA浓缩 | 第27页 |
| ·土壤DNA酶切与胶回收 | 第27页 |
| ·pUC19载体制备 | 第27-28页 |
| ·pUC19质粒提取 | 第28页 |
| ·pUC19质粒酶切与酶切载体胶回收 | 第28页 |
| ·土壤DNA酶切片段与pUC19-BamH Ⅰ载体的连接转化 | 第28-29页 |
| ·土壤宏基因组文库的评价 | 第29页 |
| ·土壤宏基因组文库保存 | 第29页 |
| ·青春河细菌多样性分析和青春河宏基因组文库的构建 | 第29-34页 |
| ·青春河宏基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·青春河细菌多样性分析 | 第30页 |
| ·青春河宏基因组文库构建 | 第30-32页 |
| ·DNA与载体Fosmid连接与转化 | 第30-31页 |
| ·青春河宏基因组DNA末端补平 | 第31-32页 |
| ·青春河宏基因组文库评价 | 第32-34页 |
| ·克隆文库的构建 | 第34页 |
| ·酯酶/脂肪酶活性筛选 | 第34页 |
| ·测序结果分析 | 第34页 |
| ·醋酶的纯化和表征 | 第34-39页 |
| ·酯酶异源表达质粒的构建 | 第34-35页 |
| ·重组酯酶蛋白EstF4K与EstP2K的镍柱亲和纯化 | 第35页 |
| ·重组表达酯酶蛋白电泳与Western Blotting | 第35-36页 |
| ·酯酶酶活力的测定 | 第36-37页 |
| ·不同碳链长度的对硝基苯酚羧酸酯的酶促水解速率 | 第37页 |
| ·温度对稳定性酯酶活性影响 | 第37页 |
| ·pH对酯酶活性及稳定性的影响 | 第37页 |
| ·金属离子对酯酶稳定性的影响 | 第37页 |
| ·有机溶剂对脂肪酶活力的影响 | 第37页 |
| ·对映选择性水解反应 | 第37-38页 |
| ·酯酶EstF4K指纹图谱与β-内酰胺酶活力测定 | 第38-39页 |
| 第三章 结果和讨论 | 第39-54页 |
| ·土壤宏基因组文库实验结果与分析 | 第39-41页 |
| ·土壤微生物DNA的获得、纯化与浓缩 | 第39页 |
| ·土壤微生物DNA酶切与pUC19载体制备 | 第39-40页 |
| ·土壤宏基因组文库构建 | 第40页 |
| ·文库评价 | 第40-41页 |
| ·青春河细菌多样性分析与宏基因组文库结果及分析 | 第41-44页 |
| ·青春河微生物基因组DNA制备 | 第41页 |
| ·青春河细菌多样性分析 | 第41-44页 |
| ·Fosmid文库的构建与评价 | 第44页 |
| ·酯酶/脂肪酶筛选 | 第44-46页 |
| ·土壤宏基因组文库筛选 | 第44-45页 |
| ·青春河宏基因组文库及亚克隆文库的筛选 | 第45-46页 |
| ·酯酶的鉴定与表征 | 第46-48页 |
| ·阳性克隆测序结果分析 | 第46页 |
| ·EstP2K和EstF4K同源基因分析 | 第46-48页 |
| ·酯酶的纯化与表征 | 第48-54页 |
| ·酯酶表达与纯化 | 第48页 |
| ·酯酶表征 | 第48-54页 |
| ·EstP2K和EstF4K底物特异性 | 第49页 |
| ·度对酶活及稳定性的影响 | 第49-50页 |
| ·pH对酶的影响 | 第50页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第50-51页 |
| ·有机溶剂对酯酶活性的影响 | 第51-52页 |
| ·酯酶的对映体选择性 | 第52页 |
| ·EstF4K底物谱与β-内酰胺酶活力 | 第52-54页 |
| 结论与展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
