| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略词表 | 第6-10页 |
| 一、文献综述 | 第10-13页 |
| ·Fas蛋白的结构特点 | 第10-11页 |
| ·Fas的机理 | 第11页 |
| ·Fas的作用 | 第11-12页 |
| ·Fas研究现状 | 第12-13页 |
| ·Fas研究展望 | 第13页 |
| 二、材料与方法 | 第13-33页 |
| ·实验材料 | 第13-17页 |
| ·实验材料的采集 | 第13页 |
| ·载体与菌株 | 第13页 |
| ·生物信息学分析工具 | 第13-14页 |
| ·主要试剂 | 第14页 |
| ·实验溶液的配制 | 第14-16页 |
| ·主要仪器设备 | 第16-17页 |
| ·试验方法 | 第17-33页 |
| ·RNA的提取 | 第17-18页 |
| ·引物设计 | 第18-19页 |
| ·RT-PCR | 第19-20页 |
| ·Fas基因cDNA的克隆 | 第20-24页 |
| ·测序与序列分析 | 第24-25页 |
| ·生物信息学分析 | 第25-26页 |
| ·原核重组表达载体的构建 | 第26-28页 |
| ·Fas在大肠杆菌中的诱导表达及表达产物分析 | 第28-30页 |
| ·表达产物的可溶性分析 | 第30-31页 |
| ·融合蛋白Fas的免疫方法 | 第31页 |
| ·采血分离抗血清 | 第31页 |
| ·重组蛋白的的抗血清琼扩实验 | 第31-32页 |
| ·Fas的血清IgG的分离纯化 | 第32页 |
| ·IgG 的 SDS-PAGE 电泳检測 | 第32页 |
| ·重组蛋白的Western blotting分析 | 第32-33页 |
| 三、结果与分析 | 第33-48页 |
| ·新疆卡拉库尔羊外周血淋巴细胞的分离 | 第33页 |
| ·新疆卡拉库尔羊外周血白细胞总RNA的提取 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR扩增Fas基因 | 第34-35页 |
| ·重组克隆质粒pMD-18T-Fas的构建与鉴定 | 第35-37页 |
| ·生物信息学分析 | 第37-41页 |
| ·糖基化位点预测 | 第37-38页 |
| ·磷酸化位点预测 | 第38-39页 |
| ·跨膜区分析 | 第39页 |
| ·疏水性分析 | 第39-40页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第40-41页 |
| ·卡拉库尔羊Fas结构功能与分析 | 第41页 |
| ·卡拉库尔羊Fas基因同源性分析 | 第41页 |
| ·原核重组表达质粒的构建和鉴定 | 第41-43页 |
| ·Fas在E.coliBl21(DE3)中的诱导表达 | 第43-46页 |
| ·Fas的诱导表达 | 第43-45页 |
| ·表达产物的可溶性分析 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白包涵体的纯化 | 第46页 |
| ·抗血清的抗原性分析 | 第46-48页 |
| ·抗血清的免疫原性测定 | 第46-47页 |
| ·兔抗融合蛋白pET-28a-Fas血清IgG的提取纯化 | 第47页 |
| ·重组蛋白pET-28a-Fas的Western blotting分析 | 第47-48页 |
| 四、讨论 | 第48-53页 |
| ·卡拉库尔羊外周血淋巴细胞总RNA提取 | 第48-49页 |
| ·克隆片段的设计 | 第49页 |
| ·克隆载体的选择 | 第49-50页 |
| ·Fas基因的序列分析 | 第50页 |
| ·Fas生物信息学预测 | 第50页 |
| ·表达菌的选择 | 第50-51页 |
| ·表达载体的选择 | 第51-52页 |
| ·Fas在E.coli BL21(DE3)的诱导表达及产物分析 | 第52页 |
| ·关于目的蛋白的可溶性分析 | 第52-53页 |
| ·融合蛋白的抗原性分析 | 第53页 |
| 五、结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
