| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-24页 |
| ·研究的目的及意义 | 第12-13页 |
| ·文献综述 | 第13-23页 |
| ·酸性蛋白酶的应用及研究进展 | 第13-16页 |
| ·丝状真菌遗传转化系统研究进展 | 第16-23页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-35页 |
| ·实验材料 | 第24-27页 |
| ·菌株及载体 | 第24页 |
| ·试剂及酶类 | 第24-26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·主要实验设备 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-35页 |
| ·菌株的培养和菌种保存 | 第27页 |
| ·黑曲霉基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·基因的扩增 | 第28-30页 |
| ·表达载体的构建及转化 | 第30-31页 |
| ·农杆菌的转化 | 第31页 |
| ·根瘤农杆菌介导法对黑曲霉菌丝体的遗传转化 | 第31-33页 |
| ·酶活性测定 | 第33页 |
| ·黑曲霉重组菌摇瓶发酵条件的研究 | 第33-34页 |
| ·酸性蛋白酶的蛋白分析 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-54页 |
| ·宇佐美曲霉pepA基因黑曲霉表达载体构建 | 第35-40页 |
| ·pepA基因与GLA5、GLA3同源臂的克隆 | 第35页 |
| ·重叠延伸PCR拼接GLA5、pepA、GLA3片段 | 第35-39页 |
| ·黑曲霉表达载体pSZH-pepA的构建 | 第39-40页 |
| ·农杆菌介导的黑曲霉菌丝体遗传转化 | 第40-48页 |
| ·表达载体pSZH-pepA导入农杆菌 | 第40-41页 |
| ·农杆菌介导黑曲霉菌丝体遗传转化体系的建立 | 第41-45页 |
| ·农杆菌介导黑曲霉菌丝体的转化 | 第45-48页 |
| ·黑曲霉重组菌株的表达检测 | 第48-50页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第48页 |
| ·酸性蛋白酶酶活的测定 | 第48-49页 |
| ·糖化酶酶活的测定 | 第49-50页 |
| ·黑曲霉重组菌摇瓶发酵条件的摸索 | 第50-54页 |
| ·初始pH对产酶的影响 | 第50-51页 |
| ·培养时间对产酶的影响 | 第51-52页 |
| ·培养温度对产酶的影响 | 第52-53页 |
| ·摇瓶发酵重组菌株酸性蛋白酶活性的测定 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| ·转化方法的确定 | 第54页 |
| ·表达载体的确定 | 第54页 |
| ·农杆菌介导黑曲霉菌丝体遗传转化的优化 | 第54-55页 |
| ·影响重组菌株产酶的因素 | 第55-56页 |
| 5 结论 | 第56-58页 |
| ·表达载体的构建 | 第56页 |
| ·农杆菌介导黑曲霉菌丝体转化体系的建立和优化 | 第56页 |
| ·酸性蛋白酶基因对黑曲霉的转化 | 第56页 |
| ·重组菌株酸性蛋白酶的蛋白检测 | 第56页 |
| ·摇瓶发酵条件的摸索 | 第56-57页 |
| ·重组菌株酸性蛋白酶的酶活力测定 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第64页 |