膨胀素工程菌的构建及表达条件的优化
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1. 引言 | 第11-23页 |
| ·膨胀素的研究进展 | 第11-15页 |
| ·膨胀素的发现 | 第11页 |
| ·膨胀素的基因家族 | 第11-12页 |
| ·膨胀素的结构 | 第12页 |
| ·膨胀素的生物化学性质 | 第12-13页 |
| ·膨胀素的功能 | 第13-14页 |
| ·膨胀素的作用机制 | 第14-15页 |
| ·纤维素研究进展 | 第15-17页 |
| ·纤维素的结构 | 第16页 |
| ·纤维素的性质 | 第16页 |
| ·纤维素的降解 | 第16-17页 |
| ·酵母表达系统研究进展 | 第17-20页 |
| ·毕赤酵母的甲醇代谢途径 | 第18页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第18-19页 |
| ·毕赤酵母的菌株 | 第19页 |
| ·毕赤酵母对分泌型外源蛋白的修饰 | 第19-20页 |
| ·毕赤酵母的培养 | 第20页 |
| ·本研究目的意义和技术路线 | 第20-23页 |
| ·本研究的目的意义 | 第20-22页 |
| ·技术路线 | 第22-23页 |
| 2. 材料与方法 | 第23-35页 |
| ·试验材料 | 第23-27页 |
| ·菌种及载体 | 第23页 |
| ·主要试剂及酶类 | 第23页 |
| ·常用试剂的配制 | 第23-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·主要实验仪器 | 第26-27页 |
| ·试验方法 | 第27-35页 |
| ·膨胀素基因的克隆 | 第27-30页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第30页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第30-31页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第31-33页 |
| ·DNS法测定滤纸分解产生的还原糖含量 | 第33页 |
| ·膨胀素蛋白活性试验 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白与纤维素酶的协同作用条件优化 | 第34页 |
| ·毕赤酵母工程菌表达条件的优化 | 第34-35页 |
| 3. 结果与分析 | 第35-50页 |
| ·膨胀素基因的克隆 | 第35-38页 |
| ·黄瓜总RNA的提取 | 第35页 |
| ·Cs-EXPA1基因的扩增 | 第35页 |
| ·Cs-EXPA2基因的扩增 | 第35-38页 |
| ·膨胀素蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第38-44页 |
| ·Cs-EXPA1基因的表达 | 第38-41页 |
| ·Cs-EXPA2基因的表达 | 第41-44页 |
| ·膨胀素蛋白活性试验 | 第44-46页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第44-45页 |
| ·不同膨胀素与纤维素酶协同作用的比较 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白与纤维素酶的协同作用条件的优化 | 第46-48页 |
| ·重组蛋白与纤维素酶的协同作用时间优化 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白与纤维素酶的协同作用pH优化 | 第47页 |
| ·重组蛋白与纤维素酶的协同作用温度优化 | 第47-48页 |
| ·毕赤酵母工程菌表达条件的优化 | 第48-50页 |
| ·毕赤酵母工程菌表达时间优化 | 第48页 |
| ·毕赤酵母工程菌表达pH优化 | 第48-49页 |
| ·毕赤酵母工程菌表达温度优化 | 第49-50页 |
| 4. 讨论 | 第50-54页 |
| ·膨胀素基因的克隆 | 第50页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第50-51页 |
| ·重组酵母表达产物的检测及表达条件优化 | 第51-52页 |
| ·膨胀素蛋白活性试验 | 第52页 |
| ·重组蛋白与纤维素酶的协同作用条件优化 | 第52-54页 |
| 5. 结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第60页 |
