| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| ·阿维菌素及其衍生物 | 第14-16页 |
| ·阿维菌素 | 第14-15页 |
| ·阿维菌素的衍生物 | 第15页 |
| ·甲胺基阿维菌素苯甲酸盐 | 第15页 |
| ·甲维盐的合成 | 第15-16页 |
| ·多功能生物催化剂——细胞色素P450 | 第16-20页 |
| ·细胞色素P450 的多样性 | 第17页 |
| ·细胞色素P450 酶系的组织形式 | 第17-18页 |
| ·细胞色素P450 的辅酶再生问题 | 第18-19页 |
| ·细胞色素P450 的应用 | 第19-20页 |
| ·链霉菌细胞色素P450 | 第20页 |
| ·生物催化在农药合成中的应用 | 第20-23页 |
| ·农药分子结构修饰 | 第21页 |
| ·手性农药去消旋化 | 第21-22页 |
| ·生物催化在农药合成中的应用展望 | 第22-23页 |
| ·本研究的立题依据及意义 | 第23页 |
| ·本研究主要内容及技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 阿维菌素4"-OH 氧化酶基因的克隆 | 第24-33页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·培养基与抗生素 | 第24页 |
| ·引物 | 第24-25页 |
| ·缓冲液及试剂配制 | 第25页 |
| ·其它主要试剂与仪器 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-28页 |
| ·菌株筛选 | 第25-26页 |
| ·链霉菌基因组提取 | 第26页 |
| ·克隆功能基因 | 第26-27页 |
| ·序列分析 | 第27-28页 |
| ·PCR 鉴定全长功能基因 | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-32页 |
| ·菌株筛选 | 第28-29页 |
| ·链霉菌基因组提取 | 第29页 |
| ·功能基因的克隆 | 第29-30页 |
| ·核酸序列分析 | 第30页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第30-31页 |
| ·蛋白空间结构预测 | 第31-32页 |
| ·小结与讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 CYP107Z13 在S. lividians TK54 中的表达及功能验证 | 第33-49页 |
| ·材料 | 第33-36页 |
| ·菌株与质粒 | 第33页 |
| ·培养基与抗生素 | 第33-34页 |
| ·缓冲液及溶液配制 | 第34-35页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第35页 |
| ·引物 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-41页 |
| ·链霉菌表达载体的构建 | 第36-38页 |
| ·pKC-Z13 重组质粒转化S. lividians TK54 | 第38-40页 |
| ·SDS-PAGE 检测CYP107Z13 的表达 | 第40页 |
| ·S. lividans TK54 重组菌转化阿维菌素 | 第40页 |
| ·CO 结合差光谱分析 | 第40-41页 |
| ·S. lividans TK54 重组菌转化阿维菌素条件优化 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-47页 |
| ·克隆cyp107213 基因 | 第41页 |
| ·链霉菌表达载体构建 | 第41-43页 |
| ·pKC-Z13 质粒转化S. lividians TK54 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测目的蛋白表达 | 第44-45页 |
| ·酶活性检测 | 第45-46页 |
| ·CO 结合差光谱分析 | 第46页 |
| ·转化条件的优化 | 第46-47页 |
| ·小结与讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 CYP107Z13 在E. coli 中的表达纯化及酶动力学研究 | 第49-63页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·菌株与质粒 | 第49页 |
| ·培养基与抗生素 | 第49页 |
| ·缓冲液及溶液配制 | 第49页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-55页 |
| ·E. coli 表达体系构建 | 第50-52页 |
| ·诱导表达CYP107Z13 蛋白 | 第52-53页 |
| ·ELISA 检测重组蛋白表达 | 第53页 |
| ·分离纯化重组蛋白 | 第53-54页 |
| ·重组蛋白浓度测定 | 第54页 |
| ·CO 差光谱分析 | 第54页 |
| ·重组蛋白酶学参数测定 | 第54-55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-62页 |
| ·cyp107Z13 基因的克隆 | 第55页 |
| ·cyp107Z13 的E. coli 表达体系构建 | 第55-57页 |
| ·CYP107Z13 重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第57-59页 |
| ·重组CYP107Z13 蛋白的纯化 | 第59-60页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第60-61页 |
| ·重组蛋白CO 差光谱分析 | 第61页 |
| ·重组蛋白酶学参数测定 | 第61-62页 |
| ·小结与讨论 | 第62-63页 |
| 第五章 全文结论与展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录1 | 第70-71页 |
| 附录2 | 第71-73页 |
| 附录3 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简介 | 第75页 |
