| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-36页 |
| ·引言 | 第19-31页 |
| ·研究背景 | 第19-22页 |
| ·国内外植物抗寒研究现状 | 第22-29页 |
| ·第二代高通量测序技术 | 第29-31页 |
| ·研究目的和意义 | 第31-33页 |
| ·研究目标和主要研究内容 | 第33-35页 |
| ·研究基础 | 第33页 |
| ·研究目标 | 第33-34页 |
| ·主要研究内容 | 第34-35页 |
| ·研究技术路线 | 第35-36页 |
| 第二章 平榛花芽转录组文库的构建及Solexa 测序 | 第36-65页 |
| ·试验材料 | 第37-38页 |
| ·植物材料 | 第37-38页 |
| ·生化试剂 | 第38页 |
| ·试验方法 | 第38-44页 |
| ·平榛花芽的转录组样品测序 | 第38-42页 |
| ·转录组冷调节基因的筛选 | 第42-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-52页 |
| ·RNA 提取 | 第44-45页 |
| ·原始测序数据产量 | 第45-46页 |
| ·中级分析结果 | 第46-47页 |
| ·高级分析结果 | 第47页 |
| ·Scaffold-gene 的GO 分类 | 第47页 |
| ·蛋白功能和分类预测 | 第47-49页 |
| ·Scaffold-gene 代谢通路分析 | 第49-51页 |
| ·Unigenes 注释 | 第51-52页 |
| ·冷调节基因的筛选及表达分析 | 第52-64页 |
| ·冷调节基因的筛选 | 第52-61页 |
| ·荧光定量分析假定平榛冷调节基因在冷适应过程中的表达 | 第61-62页 |
| ·假定冷调节基因在不同榛属植物间的表达差异 | 第62-63页 |
| ·筛选的假定冷调节基因在低温胁迫不同时间的表达差异 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 第三章 平榛基因表达分析中稳定内参的选择 | 第65-69页 |
| ·试验材料 | 第65-66页 |
| ·试验方法 | 第66页 |
| ·设计持家基因引物 | 第66页 |
| ·半定量分析持家基因的表达谱 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-67页 |
| ·小结 | 第67-69页 |
| 第四章 CBF 基因的克隆及功能鉴定 | 第69-87页 |
| ·材料与方法 | 第69-75页 |
| ·试验材料 | 第69页 |
| ·主要试剂 | 第69页 |
| ·主要仪器 | 第69-70页 |
| ·实验流程 | 第70-75页 |
| ·结果与分析 | 第75-86页 |
| ·平榛ChCBF1 cDNA 全长的获得及序列分析 | 第75-76页 |
| ·平榛ChCBF1 在不同冷适应时期花芽中的表达分析 | 第76-77页 |
| ·平榛叶片CBF1 响应低温胁迫的的荧光定量PCR 分析 | 第77页 |
| ·ChCBF1 在平榛不同组织的表达 | 第77-78页 |
| ·平榛ChCBF2 cDNA 全长的获得及序列分析 | 第78-80页 |
| ·ChCBF2 编码氨基酸区段的同源性分析及系统进化发育 | 第80-82页 |
| ·平榛ChCBF2 在花芽不同冷适应时期的表达分析 | 第82-83页 |
| ·平榛CBF2 在4℃低温处理不同时间叶片中的荧光定量PCR 分析 | 第83页 |
| ·ChCBF2 在平榛不同组织的表达 | 第83-84页 |
| ·半定量分析CBF2 在两种榛属植物中的差异表达 | 第84页 |
| ·榛属植物间CBF2 基因的序列多态性 | 第84-85页 |
| ·CBF2-GFP 融合蛋白在洋葱表皮中的表达 | 第85-86页 |
| ·小结 | 第86-87页 |
| 第五章 DHN 基因家族成员DHN1 和DHN2 的分子克隆及功能分析 | 第87-119页 |
| ·试验材料 | 第87页 |
| ·试验方法 | 第87-97页 |
| ·ChDHN 基因的克隆 | 第87-88页 |
| ·qRT-PCR 分析ChDHN 基因的时空表达 | 第88页 |
| ·pET-30a(+)-DHN2 原核表达载体的构建 | 第88-89页 |
| ·E.coli BL21 原核表达的诱导 | 第89页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第89-90页 |
| ·Western blotting 鉴定融合质粒的表达 | 第90-92页 |
| ·诱导表达pET-30a(+)-DHN2Y 的大肠杆菌耐低温鉴定 | 第92页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第92页 |
| ·启动子序列的分离 | 第92-94页 |
| ·启动子序列分析 | 第94页 |
| ·转录起始位点的确定 | 第94页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第94-95页 |
| ·农杆菌介导的烟草的转化 | 第95-96页 |
| ·转基因株系的PCR 鉴定 | 第96页 |
| ·转基因烟草生理指标的测定 | 第96-97页 |
| ·结果与分析 | 第97-117页 |
| ·DHN1 的克隆及序列分析 | 第97-99页 |
| ·DHN1 基因组DNA 的克隆 | 第99-100页 |
| ·ChDHN1 基因的时空表达 | 第100页 |
| ·平榛ChDHN2 cDNA 全长的获得及序列分析 | 第100-102页 |
| ·ChDHN2 的时空表达分析 | 第102-103页 |
| ·重组质粒pET-30a(+)-DHN2Y 的成功构建 | 第103-104页 |
| ·SDS-PAGE 电泳和Western blot 分析 | 第104-105页 |
| ·Western blot 检测重组融合蛋白反应原性 | 第105-106页 |
| ·异源表达DHN2 基因提高大肠杆菌在低温下的生存能力 | 第106页 |
| ·DHN1 启动子的克隆及分析 | 第106-109页 |
| ·DHN2 基因组序列的克隆 | 第109页 |
| ·ChDHN2 启动子的TAIL-PCR 扩增 | 第109-111页 |
| ·榛属植物间DHN2 序列的差异 | 第111-112页 |
| ·植物表达载体PBI121-DHN2Q 的构建 | 第112页 |
| ·转基因植株的获得及RT-PCR 鉴定 | 第112-113页 |
| ·转基因株系的表型观察 | 第113-115页 |
| ·低温处理下野生型和转基因烟草的生理指标差异 | 第115-117页 |
| ·小结 | 第117-119页 |
| 第六章 讨论 | 第119-123页 |
| ·木本植物抗寒研究的取材 | 第119页 |
| ·转录组测序和RACE 的结合为挖掘有价值基因搭建了一个强有力的的技术平台 | 第119-120页 |
| ·转录因子和下游功能基因的表达特点 | 第120-122页 |
| ·榛属植物冷调节网络模型的构建 | 第122-123页 |
| 第七章 结论及进一步研究的设想 | 第123-124页 |
| ·结论 | 第123页 |
| ·进一步研究的设想 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-136页 |
| 附录 | 第136-149页 |
| 缩略词 | 第149-150页 |
| 在读期间的学术研究 | 第150-151页 |
| 致谢 | 第151页 |
