| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-9页 |
| 英文缩写词表 | 第9-17页 |
| 文献综述 | 第17-51页 |
| 第一章 抗菌肽的研究进展 | 第17-51页 |
| 引言 | 第17页 |
| ·抗菌肽的发现简况 | 第17-18页 |
| ·抗菌肽的分类 | 第18-23页 |
| ·根据来源将其分为以下几类 | 第18-20页 |
| ·根据合成的部位可分为两类 | 第20页 |
| ·根据结构分类 | 第20-22页 |
| ·根据生物活性分类 | 第22页 |
| ·根据所带电荷分类 | 第22-23页 |
| ·防御素的分布 | 第23-27页 |
| ·α-防御素 | 第23-25页 |
| ·β-防御素 | 第25-26页 |
| ·θ-防御素 | 第26-27页 |
| ·防御素的分子特征 | 第27-33页 |
| ·α-防御素 | 第27-28页 |
| ·β-防御素 | 第28-30页 |
| ·θ-防御素 | 第30-31页 |
| ·昆虫防御素 | 第31-32页 |
| ·植物防御素 | 第32-33页 |
| ·抗菌肽的作用机理 | 第33-36页 |
| ·结构和功能关系 | 第36-38页 |
| ·正电荷对低聚反应的作用 | 第36页 |
| ·二硫化物排列的作用 | 第36-37页 |
| ·其它结构模式的作用 | 第37页 |
| ·防御素的活性与肽链个别氨基酸残基关系 | 第37-38页 |
| ·防御素的生物学活性 | 第38-43页 |
| ·抗细菌作用 | 第38-39页 |
| ·抗病毒作用 | 第39-40页 |
| ·抗真菌作用 | 第40页 |
| ·防御素的抗肿瘤作用 | 第40-42页 |
| ·防御素直接抗肿瘤作用 | 第41-42页 |
| ·防御素间接抗肿瘤作用 | 第42页 |
| ·防御素对免疫细胞的作用 | 第42-43页 |
| ·防御素的趋化活性 | 第43页 |
| ·防御素的应用前景 | 第43-49页 |
| ·在医药领域的应用 | 第43-46页 |
| ·食品工业中的应用 | 第46页 |
| ·在动植物抗病育种中的应用 | 第46-48页 |
| ·抗菌肽作为饲料添加剂在畜牧业中的应用 | 第48-49页 |
| ·本研究的目的、意义及研究方法 | 第49页 |
| ·结束语 | 第49-51页 |
| 研究内容 | 第51-96页 |
| 第二章 牦牛中性粒细胞防御素的提取与生物活性测试 | 第51-60页 |
| 1 材料与方法 | 第51-55页 |
| ·材料 | 第51-52页 |
| ·实验动物 | 第51页 |
| ·实验用菌种 | 第51页 |
| ·实验试剂 | 第51页 |
| ·实验仪器 | 第51页 |
| ·溶液和培养基 | 第51-52页 |
| ·方法 | 第52-55页 |
| ·牦牛PMN的分离 | 第52-53页 |
| ·测试确定牦牛PMN的漂浮密度 | 第52-53页 |
| ·PMN分离液的配制 | 第53页 |
| ·Percoll密度梯度离心法分离 | 第53页 |
| ·中性粒细胞颗粒组分的分离 | 第53页 |
| ·PMN颗粒组分中蛋白的提取 | 第53页 |
| ·抑菌活性检测 | 第53-54页 |
| ·溶血活性检测 | 第54页 |
| ·血细胞凝集活性检测 | 第54-55页 |
| 2 结果 | 第55-58页 |
| ·牦牛血液中各种细胞成分的漂浮密度 | 第55页 |
| ·PMN的纯化分离结果 | 第55-56页 |
| ·PMN颗粒组分的分离及其蛋白的提取结果 | 第56页 |
| ·抑菌活性检测结果 | 第56-57页 |
| ·溶血活性检测 | 第57页 |
| ·血细胞凝集活性检测 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-59页 |
| ·分离方法的选择 | 第58-59页 |
| ·牦牛中性粒细胞粗提物的活性 | 第59页 |
| 4 小结 | 第59-60页 |
| 第三章 牦牛中性粒细胞抗菌肽的分离纯化 | 第60-66页 |
| 1 材料与方法 | 第60-62页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·实验动物 | 第60页 |
| ·实验用菌种 | 第60页 |
| ·实验试剂 | 第60页 |
| ·实验仪器 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-62页 |
| ·牦牛中性粒细胞的获取 | 第60页 |
| ·中性粒细胞粗提物的制备 | 第60-61页 |
| ·凝胶过滤层析分离 | 第61页 |
| ·样品收集 | 第61页 |
| ·抑菌活性测定 | 第61页 |
| ·反相高效液相色谱(RP-HPLC) | 第61-62页 |
| ·抑菌活性测定 | 第62页 |
| ·质谱分析 | 第62页 |
| 2 结果 | 第62-63页 |
| ·Bio-Gel凝胶过滤的分离效果 | 第62页 |
| ·抑菌活性测定 | 第62页 |
| ·反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化的效果 | 第62-63页 |
| ·活性测定 | 第63页 |
| ·质谱测试分析 | 第63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| ·防御素的纯化方法 | 第63-64页 |
| ·防御素的色谱纯化模式的选择 | 第64-65页 |
| ·蛋白质的纯化技术的发展 | 第65页 |
| 4 小结 | 第65-66页 |
| 第四章 牦牛舌上皮组织β-防御素基因yLAP的克隆与序列分析 | 第66-81页 |
| 1 材料与方法 | 第66-71页 |
| ·材料 | 第66-67页 |
| ·试验动物及其组织 | 第66页 |
| ·菌种与载体 | 第66页 |
| ·酶和主要试剂 | 第66页 |
| ·试剂配制 | 第66页 |
| ·主要仪器设备 | 第66-67页 |
| ·方法 | 第67-71页 |
| ·牦牛舌上皮组织总RNA的提取及检测 | 第67页 |
| ·yLAP基因的扩增 | 第67-68页 |
| ·yLAP基因的克隆 | 第68-69页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第69-71页 |
| ·RT-PCR产物cDNA的序列测定 | 第71页 |
| ·序列分析 | 第71页 |
| 2 结果 | 第71-78页 |
| ·总RNA提取与检测 | 第71-72页 |
| ·RT-PCR扩增产物的电泳检测 | 第72页 |
| ·yLAP基因的克隆与鉴定 | 第72-73页 |
| ·重组质粒的电泳鉴定 | 第72-73页 |
| ·重组质粒的PCR扩增与酶切鉴定 | 第73页 |
| ·目的基因的序列测定 | 第73页 |
| ·目的基因的基本性质分析 | 第73页 |
| ·yLAP基因的核苷酸及氨基酸同源性分析 | 第73-77页 |
| ·蛋白质序列的Blast分析 | 第77-78页 |
| 3 讨论 | 第78-80页 |
| ·牦牛β-防御素yLAP的克隆 | 第79页 |
| ·牦牛β-防御素yLAP的分析 | 第79-80页 |
| 4 小结 | 第80-81页 |
| 第五章 牦牛舌β-防御素(yLAP)基因的原核表达及活性测定 | 第81-96页 |
| 1 材料与方法 | 第81-89页 |
| ·材料 | 第81-82页 |
| ·试验动物及其组织 | 第81页 |
| ·载体及菌种 | 第81页 |
| ·酶和主要试剂 | 第81页 |
| ·主要仪器 | 第81-82页 |
| ·SDS-PAGE电泳用试剂 | 第82页 |
| ·方法 | 第82-89页 |
| ·引物的设计 | 第82-83页 |
| ·yLAP基因片段的扩增 | 第83-84页 |
| ·目的片段与表达载体pET-28a的酶切回收 | 第84页 |
| ·yLAP基因片段与表达载体的连接及转化 | 第84-86页 |
| ·重组表达质粒的提取与鉴定 | 第86页 |
| ·重组质粒诱导表达 | 第86-87页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的检测 | 第87页 |
| ·重组蛋白表达条件的探索 | 第87-88页 |
| ·pET-yLAP的表达产物的初步纯化 | 第88页 |
| ·用琼脂扩散法检测表达蛋白的体外抑菌活性 | 第88-89页 |
| 2 结果 | 第89-93页 |
| ·重组表达载体的构建及鉴定 | 第89-90页 |
| ·yLAP目的基因片段的获得 | 第89页 |
| ·重组表达载体的构建及鉴定 | 第89-90页 |
| ·重组表达载体诱导产物的电泳分析 | 第90页 |
| ·不同诱导条件对重组载体pET-yLAP表达的影响 | 第90-91页 |
| ·重组载体pET-yLAP表达蛋白的分离纯化及体外活性的检测 | 第91-93页 |
| ·溶解性判定试验 | 第91-92页 |
| ·重组牦牛防御素蛋白的分离、纯化 | 第92页 |
| ·牦牛防御素重组蛋白体外抑菌活性的检测 | 第92-93页 |
| 3 讨论 | 第93-94页 |
| ·pET-yLAP在大肠杆菌中的表达 | 第93-94页 |
| ·表达重组蛋白的初步纯化 | 第94页 |
| 4 小结 | 第94-96页 |
| 结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-110页 |
| 附图 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 作者简介 | 第113-114页 |
| 导师简介 | 第114-115页 |
