| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-32页 |
| 一、肝癌与细胞凋亡 | 第14-21页 |
| 1 肝癌的形成与细胞凋亡 | 第14页 |
| 2 细胞凋亡的相关基因及作用 | 第14-16页 |
| 3 参与细胞凋亡的其他分子 | 第16-20页 |
| 4 诱导细胞凋亡的其他分子 | 第20-21页 |
| 二、肝癌的生物治疗 | 第21-26页 |
| 1 基因治疗 | 第21-22页 |
| 2 免疫治疗 | 第22-24页 |
| 3 干细胞移植治疗 | 第24页 |
| 4 抑制血管生成治疗 | 第24-25页 |
| 5 抗体靶向治疗 | 第25-26页 |
| 三、以死亡受体为靶点的肿瘤生物治疗 | 第26-31页 |
| 1 TRAIL/DR5系统抗肿瘤应用的研究 | 第26-28页 |
| 2 抗人DR5单克隆抗体的抗肿瘤研究 | 第28-29页 |
| 3 以DR3为靶点的肿瘤生物治疗的意义 | 第29-31页 |
| 四、阿霉素与放线菌素-D等化疗药物的抗瘤作用 | 第31-32页 |
| 1 阿霉素的作用机制 | 第31页 |
| 2 放线菌素-D的作用机制 | 第31-32页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第32-34页 |
| 一、研究目的和意义 | 第32页 |
| 二、研究内容 | 第32-34页 |
| 第三章 融合蛋白DR5的表达、鉴定 | 第34-56页 |
| 一、材料与方法 | 第34-48页 |
| 1 实验材料 | 第34-37页 |
| ·菌株及质粒 | 第34页 |
| ·生物信息学工具 | 第34页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第34-35页 |
| ·主要仪器及设备 | 第35页 |
| ·主要溶液的配制 | 第35-37页 |
| 2 实验方法 | 第37-48页 |
| ·确定DR5的核苷酸序列 | 第37页 |
| ·DR5核苷酸的分段与合成 | 第37-38页 |
| ·重叠PCR组装DR5基因 | 第38-40页 |
| ·原核表达质粒pET-22b(+)/DR5的构建与转化 | 第40-42页 |
| ·重组子的筛选与序列分析 | 第42-44页 |
| ·目的蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第44-48页 |
| ·目的蛋白ELISA鉴定其特异性 | 第48页 |
| ·目的蛋白MTT法鉴定其活性 | 第48页 |
| 二 结果与分析 | 第48-54页 |
| 1.DR5胞外域编码序列的重组 | 第48-49页 |
| 2 菌落PCR的筛选结果 | 第49页 |
| 3 pET-22b(+)/DR5的双酶切结果 | 第49-50页 |
| 4 DR5基因的表达和纯化 | 第50-53页 |
| 5 sDR5浓度的确定 | 第53页 |
| 6 特异性鉴定 | 第53页 |
| 7 可溶性DR5的生物活性鉴定 | 第53-54页 |
| 三 讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 Anti-DR5单克隆抗体的制备及对鼠肝癌细胞的作用分析 | 第56-73页 |
| 一、材料和方法 | 第56-60页 |
| 1 材料 | 第56-58页 |
| ·实验大鼠 | 第56页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第56页 |
| ·主要仪器及设备 | 第56-57页 |
| ·主要溶液的配制 | 第57-58页 |
| 2 方法 | 第58-60页 |
| ·抗DR5单克隆抗体的制备 | 第58页 |
| ·体外单克隆抗体对肝癌细胞的杀伤作用 | 第58-59页 |
| ·肿瘤动物模型的建立及分组 | 第59页 |
| ·肿瘤动物模型的药物治疗 | 第59页 |
| ·小鼠体重的称量及药物对小鼠存活率的影响观察 | 第59页 |
| ·各组织器官的获取及肿瘤大小、重量的测量 | 第59-60页 |
| ·HE染色、脱水和封片 | 第60页 |
| ·TUNEL法检测细胞凋亡率 | 第60页 |
| ·数据处理 | 第60页 |
| 二、结果与分析 | 第60-70页 |
| 1 小鼠的免疫和Anti-DR5 mAb的制备 | 第60页 |
| 2 Anti-DR5 mAb,AMD and ACTD对HCC肿瘤细胞毒作用 | 第60-62页 |
| 3 流式细胞仪对细胞凋亡分析 | 第62-63页 |
| 4 肿瘤大小、重量的测量 | 第63-64页 |
| 5 各组小鼠体重变化 | 第64-66页 |
| 6 小鼠存活率结果 | 第66页 |
| 7 HE染色 | 第66-68页 |
| 8 TUNEL检测 | 第68-70页 |
| 三、讨论 | 第70-73页 |
| 总结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 致谢语 | 第80页 |
