| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一章 间日疟原虫乳酸脱氢酶重组表达质粒的构建及鉴定 | 第17-27页 |
| 第一节 材料 | 第17-19页 |
| ·主要材料 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·引物 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| ·细菌培养基 | 第18-19页 |
| 第二节 实验方法 | 第19-21页 |
| ·间日疟原虫基因组DNA的提取 | 第19页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第19页 |
| ·TA重组质粒的构建 | 第19页 |
| ·阳性克隆的筛选及鉴定 | 第19页 |
| ·PCR鉴定 | 第19页 |
| ·酶切鉴定取阳性重组克隆 | 第19页 |
| ·DNA序列测定及生物信息学分析 | 第19-21页 |
| 第三节 结果 | 第21-26页 |
| ·PvLDH基因的扩增与鉴定 | 第21页 |
| ·重组TA质粒的构建及鉴定 | 第21-22页 |
| ·序列测定及其推导氨基酸序列的生物信息学分析 | 第22-26页 |
| ·物理化学性质预测 | 第22-23页 |
| ·同源性分析 | 第23-24页 |
| ·抗原表位预测 | 第24-25页 |
| ·保守功能域分析 | 第25页 |
| ·二级结构预测 | 第25-26页 |
| 第四节 讨论 | 第26-27页 |
| 第二章 间日疟原虫乳酸脱氢酶的表达、纯化及免疫原性研究 | 第27-41页 |
| 第一节 材料 | 第27-29页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·菌株及实验动物 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第27-29页 |
| 第二节 实验方法 | 第29-32页 |
| ·LDH融合蛋白的诱导表达 | 第29-30页 |
| ·表达产物超声破菌后的SDS-PAGE分析 | 第29页 |
| ·表达条件的优化 | 第29-30页 |
| ·包涵体的提取 | 第30页 |
| ·包涵体的溶解变性 | 第30页 |
| ·包涵体的复性 | 第30-31页 |
| ·稀释复性 | 第30页 |
| ·透析复性 | 第30-31页 |
| ·GST亲合层析纯化 | 第31页 |
| ·表达产物鉴定 | 第31-32页 |
| ·多抗的制备及鉴定 | 第31页 |
| ·Western-blot分析 | 第31-32页 |
| 第三节 结果 | 第32-39页 |
| ·LDH/pGEX-4T-1在大肠杆菌中的表达 | 第32页 |
| ·表达条件的优化 | 第32-35页 |
| ·诱导时机 | 第32-33页 |
| ·诱导剂浓度 | 第33-34页 |
| ·诱导温度 | 第34-35页 |
| ·包涵体的洗涤 | 第35页 |
| ·包涵体的复性 | 第35-36页 |
| ·稀释复性 | 第35-36页 |
| ·透析复性 | 第36页 |
| ·GST亲和层析纯化 | 第36-37页 |
| ·免疫学活性鉴定 | 第37-39页 |
| 第四节 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 单克隆抗体的制备及鉴定 | 第41-49页 |
| 第一节 材料 | 第41-43页 |
| ·主要试剂 | 第41-43页 |
| ·蛋白电泳试剂 | 第41页 |
| ·细胞培养试剂 | 第41页 |
| ·其它试剂 | 第41页 |
| ·细胞 | 第41页 |
| ·动物 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·主要试剂配制 | 第41-43页 |
| 第二节 实验方法 | 第43-45页 |
| ·抗原制备 | 第43页 |
| ·动物免疫 | 第43页 |
| ·细胞融合 | 第43页 |
| ·阳性克隆的筛选与克隆化 | 第43-44页 |
| ·诱生腹水 | 第44页 |
| ·效价测定 | 第44页 |
| ·单克隆抗体特异性鉴定 | 第44页 |
| ·单克隆的稳定性鉴定 | 第44-45页 |
| 第三节 结果 | 第45-47页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第45页 |
| ·单克隆抗体培养上清的效价 | 第45页 |
| ·单克隆抗体特异性鉴定 | 第45-46页 |
| ·单克隆的稳定性 | 第46-47页 |
| 第四节 讨论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 成果 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |