| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-15页 |
| 略语表 | 第15-17页 |
| 第1章 文献综述 | 第17-47页 |
| ·猪链球菌病 | 第17-35页 |
| ·前言 | 第17-18页 |
| ·历史 | 第18页 |
| ·病原学 | 第18页 |
| ·流行病学 | 第18-19页 |
| ·血清型 | 第19-20页 |
| ·毒力(相关)因子 | 第20-25页 |
| ·基因分型 | 第25-27页 |
| ·致病机理 | 第27-28页 |
| ·临床症状 | 第28-31页 |
| ·病理变化 | 第31页 |
| ·诊断 | 第31-32页 |
| ·猪链球菌的分离与鉴定 | 第32-34页 |
| ·治疗和预防 | 第34-35页 |
| ·细菌双组分信号转导系统研究概述 | 第35-41页 |
| ·双组分信号转导系统的组成及其信号转导模式 | 第37页 |
| ·细菌双组分信号转导系统与细菌毒力的关系 | 第37-39页 |
| ·细菌双组分信号转导系统的应用前景 | 第39-40页 |
| ·链球菌属的双组分信号转导系统概述 | 第40-41页 |
| ·4酵母双杂交技术 | 第41-47页 |
| ·酵母双杂交技术介绍 | 第41页 |
| ·酵母双杂交技术原理 | 第41-44页 |
| ·Cyto-Trap酵母双杂交技术与传统酵母双杂交技术比较 | 第44页 |
| ·酵母双杂交技术的应用 | 第44-47页 |
| 第2章 猪链球菌2型revS基因缺失株的构建及其生物学特性研究 | 第47-80页 |
| ·研究的目的与意义 | 第47页 |
| ·材料与方法 | 第47-66页 |
| ·主要药品及试剂 | 第47-48页 |
| ·培养基与抗生素及其配制 | 第48页 |
| ·主要缓冲液 | 第48-51页 |
| ·菌株、细胞株及质粒 | 第51-53页 |
| ·主要培养基和抗生素 | 第53-54页 |
| ·本研究中所用的引物 | 第54-55页 |
| ·实验动物 | 第55页 |
| ·SS2基因组DNA的制备 | 第55-56页 |
| ·猪链球菌2型revS基因上下游同源臂、ORF及全长序列的扩增 | 第56页 |
| ·PCR或酶切产物的回收与纯化 | 第56页 |
| ·克隆载体的构建及测序 | 第56-58页 |
| ·猪链球菌RNA的提取 | 第58-59页 |
| ·RT-PCR | 第59页 |
| ·体外的相对定量 | 第59页 |
| ·自杀性重组质粒和互补质粒的构建及鉴定 | 第59-60页 |
| ·猪链球菌2型revS基因缺失菌株和互补菌株的构建及鉴定 | 第60-63页 |
| ·猪链球菌2型revS基因缺失菌株和互补菌株的生物学特性研究 | 第63-65页 |
| ·猪链球菌revS基因缺失菌株和互补菌株作为候选疫苗菌株的研究 | 第65-66页 |
| ·结果 | 第66-76页 |
| ·猪链球菌2型revS基因的克隆与序列分析 | 第66-67页 |
| ·自杀质粒pSET4s-P1-P2和互补质粒pAT18-revS的构建及鉴定 | 第67-68页 |
| ·猪链球菌2型revS基因缺失菌株和互补菌株的筛选与鉴定 | 第68-69页 |
| ·猪链球菌2型revS基因缺失菌株和互补菌株的生物学特性研究 | 第69-75页 |
| ·猪链球菌2型revS基因缺失菌株和互补菌株作为候选疫苗菌株的研究 | 第75-76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| ·猪链球菌2型revS与链球菌致病性的关系 | 第76-77页 |
| ·pSET4s自杀性穿梭质粒在缺失菌株构建中的问题 | 第77-78页 |
| ·pAT18质粒介导互补菌株构建中的问题 | 第78页 |
| ·猪链球菌的电转化与突变菌株的构建 | 第78页 |
| ·小结 | 第78-80页 |
| 第3章 HYL与宿主细胞蛋白相互作用研究 | 第80-112页 |
| ·研究目的与意义 | 第80页 |
| ·材料与方法 | 第80-98页 |
| ·主要药品与试剂 | 第80-81页 |
| ·主要缓冲液 | 第81-82页 |
| ·菌株、细胞株及质粒 | 第82-86页 |
| ·引物 | 第86-87页 |
| ·培养基 | 第87-89页 |
| ·cDNA文库 | 第89页 |
| ·试剂盒 | 第89页 |
| ·SS2基因组DNA的制备 | 第89页 |
| ·PCR扩增Hyl基因 | 第89页 |
| ·pMD-18T-Hyl克隆载体的构建及测序 | 第89-91页 |
| ·pSos-Hyl及pET-28c-Hyl重组载体的构建 | 第91-92页 |
| ·cDNA文库扩增 | 第92页 |
| ·cdc25H酵母细胞表型的鉴定 | 第92页 |
| ·pSos-Hyl自激活活性的验证 | 第92页 |
| ·共转化cdc25H酵母细胞及培养 | 第92-93页 |
| ·菌落的复制培养及候选阳性克隆的选择 | 第93-94页 |
| ·转化效率的计算 | 第94页 |
| ·候选阳性克隆Target质粒的提取 | 第94页 |
| ·候选阳性克隆质粒的扩增及酶切鉴定 | 第94页 |
| ·Target质粒自激活活性的验证 | 第94页 |
| ·阳性质粒DNA测序及分析 | 第94-95页 |
| ·HYL原核表达 | 第95-96页 |
| ·WIZF,AI1,ADD3和AITP的克隆 | 第96页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第96页 |
| ·WIZF、AI1、ADD3和AITP的真核表达 | 第96-97页 |
| ·Western-blotting检测WIZF、AI1、ADD3和AITP表达产物 | 第97页 |
| ·免疫共沉淀试验 | 第97-98页 |
| ·结果 | 第98-104页 |
| ·猪链球菌2型Hly基因的PCR扩增 | 第98-99页 |
| ·重组载体的构建与鉴定 | 第99页 |
| ·cdc25H酵母细胞表型的鉴定 | 第99-100页 |
| ·pSos-Hyl自激活活性的验证 | 第100页 |
| ·共转化cdc25H酵母细胞及阳性克隆的筛选 | 第100页 |
| ·转化效率的计算 | 第100页 |
| ·Target质粒自激活活性的验证 | 第100-101页 |
| ·Target质粒的酶切鉴定 | 第101-102页 |
| ·测序及BLAST分析 | 第102页 |
| ·SDS-PAGE和Western-blotting检测HYL原核表达 | 第102页 |
| ·WIZF、AI1、ADD3和AITP基因的PCR扩增 | 第102-103页 |
| ·真核表达载体的酶切鉴定 | 第103页 |
| ·WIZF、AI1、ADD3和AITP的真核表达 | 第103-104页 |
| ·免疫共沉淀试验 | 第104页 |
| ·讨论 | 第104-111页 |
| ·猪链球菌与宿主相互作用研究 | 第104-105页 |
| ·酵母双杂交技术的应用 | 第105页 |
| ·CytoTrap酵母双杂交系统 | 第105-106页 |
| ·HYL与SS2致病性的关系 | 第106页 |
| ·AI1的功能及其与致病的关系 | 第106-107页 |
| ·ADD3的功能及其与致病的关系 | 第107-108页 |
| ·AITP的功能及其与致病的关系 | 第108页 |
| ·cDNA文库与互做蛋白的筛选 | 第108页 |
| ·Bait蛋白自激活作用 | 第108-109页 |
| ·Target蛋白的自激活作用 | 第109页 |
| ·酵母细胞互补突变 | 第109页 |
| ·酵母双杂交系统的假阳性 | 第109页 |
| ·感受态细胞的制备及转化效率 | 第109-110页 |
| ·未调到透明质酸或其亚基的原因 | 第110页 |
| ·免疫共沉淀试验 | 第110-111页 |
| ·小结 | 第111-112页 |
| 第4章 全文总结 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-129页 |
| Curriculum Vitae | 第129-130页 |
| 博士期间发表的主要论文 | 第130-131页 |
| 致谢 | 第131页 |
