| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-31页 |
| 一、胚胎干细胞的研究历史及现状 | 第10-20页 |
| 1 鸡胚胎干细胞的离体培养 | 第10-15页 |
| ·鸡的生理特点 | 第10-11页 |
| ·胚胎干细胞的分离和培养 | 第11-12页 |
| ·鸡胚胎干细胞的离体培养体系 | 第12-15页 |
| 2 胚胎干细胞的鉴定 | 第15-17页 |
| ·形态学鉴定 | 第15-16页 |
| ·AKP 活性鉴定 | 第16页 |
| ·SSEAs 检测 | 第16页 |
| ·分化试验 | 第16页 |
| ·嵌合体试验 | 第16-17页 |
| ·ES 细胞的定向分化潜能 | 第17页 |
| 3 胚胎干细胞的应用 | 第17-20页 |
| ·基础研究 | 第18页 |
| ·生产克隆动物 | 第18页 |
| ·生产药物蛋白 | 第18-19页 |
| ·生产转基因鸡 | 第19页 |
| ·品种改良 | 第19-20页 |
| 二、“睡美人”转座子系统研究进展 | 第20-29页 |
| 1 “睡美人”的分子重建 | 第20-23页 |
| ·重建对象的选择 | 第20-21页 |
| ·“睡美人”转座酶基因的重建 | 第21-23页 |
| ·“睡美人”转座酶的特异识别序列 | 第23页 |
| 2 SB 转座系统的结构 | 第23-25页 |
| ·转座酶基因 | 第23-25页 |
| ·反向重复序列 | 第25页 |
| 3 转座的机制 | 第25-26页 |
| 4 “睡美人”转座酶的应用前景 | 第26-28页 |
| ·用作转基因载体 | 第26-27页 |
| ·基因治疗 | 第27页 |
| ·新基因的发现 | 第27-28页 |
| 5 SB 转座子的检测 | 第28页 |
| 6 报告基因 | 第28-29页 |
| 三、本研究的目的和意义 | 第29-31页 |
| 第二章 实验部分 | 第31-51页 |
| 实验一 鸡胚胎干细胞单细胞克隆的制备 | 第31-37页 |
| 1 材料与方法 | 第31-33页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·饲养层的制备 | 第31页 |
| ·鸡Ⅹ期胚盘细胞的分离和培养 | 第31-32页 |
| ·鸡ES 单细胞克隆制备 | 第32-33页 |
| ·鸡ES 细胞单细胞克隆的鉴定和计算 | 第33页 |
| 2 实验结果 | 第33-35页 |
| ·单细胞克隆的制备 | 第33-34页 |
| ·鸡 ES 细胞单细胞克隆的鉴定结果 | 第34-35页 |
| 3 讨论 | 第35-37页 |
| 实验二 PT-EGFP 质粒的构建以及PT-EGFP 和SB 系统转精原干细胞 | 第37-51页 |
| 1 材料和方法 | 第37-46页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·实验试剂 | 第38-40页 |
| ·仪器设备 | 第40页 |
| ·碱裂解法大量制备质粒DNA | 第40页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第40-41页 |
| ·载体DNA 和EGFP 质粒的限制性内切酶消化、电泳及回收 | 第41-42页 |
| ·载体与目的片段的连接 | 第42页 |
| ·连接产物的转化 | 第42页 |
| ·表达载体的鉴定 | 第42-43页 |
| ·饲养层的制备 | 第43页 |
| ·鸡胚 SSCs 分离、培养和传代 | 第43-44页 |
| ·电穿孔法转染 SSCs | 第44页 |
| ·转染后的鸡胚SSCs 的培养传代 | 第44-45页 |
| ·转染率的观察与计算 | 第45页 |
| ·数据处理 | 第45页 |
| ·转染后第二代细胞的PCR 检测 | 第45-46页 |
| 2 结果 | 第46-49页 |
| ·质粒构建 | 第46页 |
| ·PT-EGFP 和 SB 系统转精源干细胞 | 第46-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 全文结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 攻读学位期间发表的论文目录 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |