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声波刺激对铁皮石斛生长代谢的影响及其相关基因表达和克隆研究

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-18页
1 绪论第18-34页
   ·引言第18页
   ·铁皮石斛资源及其研究概况第18-22页
     ·铁皮石斛资源第18-19页
     ·铁皮石斛的研究概况第19-21页
     ·环境对铁皮石斛生长代谢的影响第21-22页
   ·应力对植物生长代谢的影响第22-26页
     ·应力与植物生长第22-24页
     ·应力与植物生理代谢第24-26页
   ·应力作用下植物基因的表达调控第26-29页
     ·与物理刺激诱导相关的基因及其表达第26-27页
     ·TCH基因表达调控第27-29页
   ·本文的研究工作第29-34页
     ·本研究的目的与意义第29页
     ·本文主要研究工作第29-30页
     ·本文的研究思路与构想第30-34页
2 实验材料与声波刺激对其组培苗的影响第34-40页
   ·引言第34页
   ·实验材料的培养第34-35页
     ·取材第34页
     ·培养基的配制第34-35页
     ·铁皮石斛原球茎的培养第35页
     ·铁皮石斛幼苗的培养第35页
   ·声波加载模型与材料的处理第35-37页
     ·实验加载装置第35-36页
     ·材料的处理第36页
     ·鲜重的测定第36-37页
   ·结果与分析第37-38页
     ·一定强度下不同频率的声波对铁皮石斛组培苗鲜重的影响第37页
     ·一定频率下不同强度的声波对铁皮石斛组培苗鲜重的影响第37-38页
   ·讨论第38-40页
3 声波刺激对铁皮石斛抗氧化酶活性的影响第40-54页
   ·引言第40-41页
   ·材料与方法第41-44页
     ·实验材料及处理第41页
     ·APX酶液的制备及活性测定第41-42页
     ·SOD酶液制备及活性测定第42页
     ·CAT酶液的制备及活性测定第42-43页
     ·POD酶液的制备及活性测定第43页
     ·统计方法第43-44页
   ·结果与分析第44-49页
     ·声波刺激对铁皮石斛叶、茎、根APX活性的影响第44-45页
     ·声波刺激对铁皮石斛叶、茎、根SOD活性的影响第45-46页
     ·声波刺激对铁皮石斛叶、茎、根CAT活性的影响第46-47页
     ·声波刺激对铁皮石斛叶、茎、根POD活性的影响第47-49页
   ·讨论第49-53页
     ·声波刺激对植物各器官酶活性的影响第49-50页
     ·声波刺激诱导下植物细胞活性氧的产生第50-51页
     ·AOS是植物响应声波刺激的一个重要的信号分子第51-52页
     ·声波刺激植物幼苗生长的可能机制第52-53页
   ·小结第53-54页
4 声波刺激对铁皮石斛代谢产物的影响第54-68页
   ·引言第54页
   ·材料与方法第54-58页
     ·实验材料及处理第54页
     ·仪器与试剂第54-55页
     ·石斛多糖的提取及含量测定第55-56页
     ·总生物碱的提取及含量测定第56页
     ·可溶性蛋白质含量的测定第56-57页
     ·游离脯氨酸含量的测定第57页
     ·丙二醛含量的测定第57-58页
   ·结果与分析第58-63页
     ·声波刺激对铁皮石斛多糖含量的影响第58-59页
     ·声波刺激对铁皮石斛生物碱含量的影响第59-61页
     ·声波刺激对铁皮石斛可溶性蛋白质含量的影响第61-62页
     ·声波刺激对铁皮石斛游离脯氨酸含量的影响第62页
     ·声波刺激对铁皮石斛丙二醛含量的影响第62-63页
   ·讨论第63-66页
     ·测定方法的考察第63-64页
     ·声波刺激对铁皮石斛多糖和石斛碱代谢的影响第64页
     ·声波刺激对铁皮石斛可溶性蛋白质含量的影响第64-65页
     ·声波刺激对铁皮石斛丙二醛含量的影响第65-66页
   ·小结第66-68页
5 声波刺激对铁皮石斛POD同工酶基因表达的影响第68-78页
   ·引言第68-69页
   ·材料与方法第69-73页
     ·实验材料及处理第69页
     ·仪器与试剂第69-70页
     ·POD同工酶的提取与PAGE电泳第70页
     ·RNA的提取第70页
     ·RT-PCR扩增与电泳第70-71页
     ·目的条带的回收纯化第71页
     ·Northern点杂交第71-73页
   ·实验结果第73-75页
     ·声波刺激下铁皮石斛POD同工酶酶谱第73-74页
     ·RT-PCR扩增铁皮石斛POD基因片段第74页
     ·Northern点杂交研究该基因在声波刺激下的表达第74-75页
   ·讨论第75-77页
     ·声波刺激对铁皮石斛POD同工酶的影响第75-76页
     ·声波刺激对铁皮石斛POD同工酶基因表达的影响第76页
     ·POD同工酶基因表达与环境应力的关系第76-77页
   ·小结第77-78页
6 声波刺激下铁皮石斛差异表达基因的筛选、克隆与生物信息学分析第78-112页
   ·引言第78-79页
   ·材料与方法第79-85页
     ·实验材料及处理第79页
     ·主要试剂与引物第79-80页
     ·RNA的提取与检测[218]第80页
     ·DDRT-PCR扩增与电泳检测第80-82页
     ·差异条带的回收、重扩增及检测第82-83页
     ·差异条带的Reverse Northern Blot杂交鉴定第83页
     ·差异片段的回收、重组和克隆第83-84页
     ·差异片段的序列分析第84-85页
   ·结果与分析第85-106页
     ·刺激组和对照组总RNA的比较第85-86页
     ·差异片段的筛选第86-88页
     ·差异条带的回收、重扩增、电泳检测第88页
     ·Reverse Northern Blot杂交结果第88-89页
     ·差异片段的克隆及其鉴定第89-90页
     ·差异表达的基因片段序列分析第90-97页
     ·相关基因的生物信息学初步分析第97-106页
   ·讨论第106-110页
     ·差异显示技术在植物对环境应力表达中的作用第106-107页
     ·声波刺激对铁皮石斛特异表达基因的影响第107-108页
     ·环境应力与植物基因的表达调控第108-110页
   ·小结第110-112页
7 结论与展望第112-120页
   ·本文的主要结论第112-114页
     ·声波刺激对铁皮石斛生长的影响第112页
     ·声波刺激对铁皮石斛代谢的影响第112-113页
     ·声波刺激下铁皮石斛基因表达、筛选与分析第113-114页
   ·应力与植物生长代谢和基因表达问题的探讨第114-117页
     ·植物感应环境应力刺激的生理阶段第114页
     ·应力对植物生长和代谢的影响第114-115页
     ·应力作用植物细胞的信号传递和基因表达过程第115-117页
   ·本文的创新之处第117-118页
   ·后续工作建议与展望第118-120页
致谢第120-122页
参考文献第122-138页
附录第138-139页
 攻读博士学位期间的科研成果第138-139页
  A.主持或主研的科研课题第138页
  B. 所发表的与本课题相关论文第138-139页
  C. 攻读博士学位期间参加的国内外学术会议第139页

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