| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-29页 |
| ·β-葡聚糖概述 | 第12页 |
| ·β-1，3-1,4-葡聚糖酶 | 第12-17页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶分布 | 第12-13页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶结构与性质 | 第13-15页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶功能及应用 | 第15页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因克隆及表达研究 | 第15-17页 |
| ·原核表达系统——pET系统 | 第17-18页 |
| ·pET系统概述 | 第17页 |
| ·pET载体 | 第17-18页 |
| ·pET宿主菌 | 第18页 |
| ·巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris(简写P.pastoris)表达系统 | 第18-25页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的优势特点 | 第18-19页 |
| ·表达载体 | 第19-22页 |
| ·翻译后修饰及加工 | 第22-23页 |
| ·P.pastoris发酵条件研究 | 第23-24页 |
| ·P.pastoris发酵策略研究 | 第24-25页 |
| ·外源基因自身的改造方法 | 第25-26页 |
| ·存在问题及实验方案 | 第26-28页 |
| ·本研究目的及意义 | 第28-29页 |
| 第二章 天然菌株地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis EGW039产酶研究 | 第29-33页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-30页 |
| ·产酶培养基的优化 | 第29页 |
| ·发酵条件的优化 | 第29-30页 |
| ·酶活测定 | 第30页 |
| ·结果与分析 | 第30-32页 |
| ·不同碳氮源的影响 | 第30-31页 |
| ·发酵条件的优化 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 原核表达:地衣芽孢杆菌B.licheniformis EGW039来源β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因克隆及其在E.coli BL21(DE3)中表达 | 第33-53页 |
| ·材料 | 第33-35页 |
| ·方法 | 第35-40页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因克隆与重组载体的构建 | 第35-38页 |
| ·重组大肠杆菌的构建 | 第38-39页 |
| ·重组酶的诱导表达与SDS-PAGE | 第39页 |
| ·重组酶的纯化 | 第39-40页 |
| ·重组酶的酶学性质 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-51页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的克隆 | 第40-41页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶的序列分析和高级结构模拟 | 第41-44页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第44-47页 |
| ·重组酶的SDS-PAGE | 第47页 |
| ·重组酶的纯化 | 第47-48页 |
| ·重组酶的酶学性质 | 第48-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| ·表达水平研究 | 第51页 |
| ·表达系统研究 | 第51-52页 |
| ·酶学性质研究 | 第52-53页 |
| 第四章 真核表达:β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因改造及其在P.pastoris GS115中表达 | 第53-78页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·方法 | 第54-60页 |
| ·B.licheniformis EGW039来源β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因改造 | 第54-55页 |
| ·重组载体的构建 | 第55-56页 |
| ·重组酵母的构建 | 第56-57页 |
| ·重组酵母的产酶发酵 | 第57-58页 |
| ·发酵参数的检测 | 第58-59页 |
| ·重组酶的酶学性质 | 第59页 |
| ·酶解产物分析 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-72页 |
| ·密码子优化β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因序列分析 | 第60-61页 |
| ·重组表达载体的构建及验证 | 第61-63页 |
| ·重组酵母的构建 | 第63页 |
| ·重组酵母的产酶发酵 | 第63-68页 |
| ·重组酶的酶学性质 | 第68-72页 |
| ·讨论 | 第72-78页 |
| ·密码子优化 | 第73页 |
| ·表达载体、宿主菌株的优化选择 | 第73页 |
| ·重组酵母发酵罐水平上的条件优化 | 第73-74页 |
| ·P.pastoris GS115/pPIC9K-M-eg1314高密度发酵的优势 | 第74-75页 |
| ·基因重组与表达策略研究 | 第75-76页 |
| ·提高表达产物稳定性的研究 | 第76-78页 |
| 第五章 结论与展望 | 第78-80页 |
| ·主要研究结果如下 | 第78-79页 |
| ·展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 作者简历 | 第87页 |
