| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 缩写对比表 | 第10-11页 |
| 图目录 | 第11-12页 |
| 表目录 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| ·细菌对抗菌药物的耐药 | 第13-15页 |
| ·细菌抗生素耐药性的分类 | 第13-14页 |
| ·细菌对抗生素耐药性现状 | 第14页 |
| ·铜绿假单胞菌中多重耐药概况 | 第14-15页 |
| ·β-内酰胺类抗生素的分类 | 第15-16页 |
| ·青霉素类 | 第15页 |
| ·头孢菌素类 | 第15-16页 |
| ·β-内酰胺酶抑制剂 | 第16页 |
| ·其他β-内酰胺类抗生素 | 第16页 |
| ·β-内酰胺类抗生素的作用机制 | 第16-18页 |
| ·铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗生素的耐药机制 | 第18-27页 |
| ·产生β-内酰胺水解酶 | 第19-22页 |
| ·形成生物被膜 | 第22-23页 |
| ·改变细菌外膜通透性 | 第23-24页 |
| ·外排泵表达的变化 | 第24-26页 |
| ·青霉素结合蛋白的改变 | 第26-27页 |
| 第二章 材料和方法 | 第27-41页 |
| ·材料 | 第27-29页 |
| ·实验菌株和质粒来源及保存 | 第27-28页 |
| ·试剂 | 第28-29页 |
| ·仪器 | 第29页 |
| ·基本实验方法 | 第29-34页 |
| ·培养基和缓冲液的配制 | 第29-30页 |
| ·药敏片的制备 | 第30页 |
| ·质粒的小量提取 | 第30-31页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第31页 |
| ·琼脂糖凝胶DNA回收 | 第31-32页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·电转化 | 第32页 |
| ·引物设计 | 第32-33页 |
| ·基因启动子--报道子载体发光强度检测 | 第33-34页 |
| ·突变体对β-内酰胺类抗菌药物耐药机制的研究方法 | 第34-41页 |
| ·转座突变体的筛选 | 第34-35页 |
| ·随机PCR和测序 | 第35-36页 |
| ·基因敲除突变体构建 | 第36-37页 |
| ·突变体对抗生素敏感性试验 | 第37-38页 |
| ·LB液体培养基中PAO1及突变体MIC的测定 | 第38页 |
| ·突变体β-内酰胺酶活力测定 | 第38-39页 |
| ·突变体敏感协同试验 | 第39页 |
| ·PAO中PBPs表达报道载体的构建及测定 | 第39-40页 |
| ·突变体AmpC,RND外排泵和OprD表达的测定 | 第40页 |
| ·生物被膜的测定 | 第40-41页 |
| 第三章 结果 | 第41-57页 |
| ·对β-内酰胺类抗性转座突变体的筛选结果 | 第41-42页 |
| ·在LB固体平板上初步筛选结果 | 第41页 |
| ·在LB液体培养基中的筛选结果 | 第41-42页 |
| ·转座子插入位点的确定 | 第42-44页 |
| ·随机PCR和测序 | 第42-43页 |
| ·突变基因的功能和引起耐药的原因 | 第43-44页 |
| ·相应基因敲除突变体构建 | 第44-47页 |
| ·突变体基因片段连接pEX18Tc验证结果 | 第45-46页 |
| ·基因敲除突变PCR验证结果 | 第46-47页 |
| ·突变体对抗生素敏感性的变化 | 第47-49页 |
| ·测定突变体在液体LB中的MIC | 第49页 |
| ·突变体β-内酰胺酶活性测试结果 | 第49-50页 |
| ·突变体纸片协同试验 | 第50-51页 |
| ·产金属β-内酰胺酶(MBLs酶)的检测结果 | 第50-51页 |
| ·产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs酶)的检测结果 | 第51页 |
| ·突变体生物被膜量的测定 | 第51-52页 |
| ·突变体AmpC表达测定结果 | 第52-53页 |
| ·突变体中青霉素结合蛋白(PBPs)的表达 | 第53-54页 |
| ·突变体中外膜通透蛋白(OprD)的表达 | 第54页 |
| ·突变体RND外排泵检测结果 | 第54-57页 |
| 讨论 | 第57-61页 |
| 参考文献 | 第61-71页 |
| 致谢 | 第71页 |