| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-20页 |
| ·蜘蛛丝蛋白的特性 | 第13-15页 |
| ·蜘蛛丝蛋白基因的结构、克隆和表达的研究进展 | 第15-18页 |
| ·应用前景 | 第18-19页 |
| ·本论文的研究内容、目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第20-42页 |
| ·实验材料 | 第20-26页 |
| ·菌株和载体 | 第20-22页 |
| ·酶与试剂 | 第22页 |
| ·常用试剂与培养基的配制 | 第22-25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-40页 |
| ·大腹园蛛主壶腹腺腺体的解剥分离 | 第26页 |
| ·引物的设计与合成 | 第26页 |
| ·对国际基因库中的拖丝蛋白基因比对和分析 | 第26页 |
| ·引物的设计与合成 | 第26页 |
| ·不同方法提取大腹园蛛主壶腹腺基因组DNA | 第26-30页 |
| ·苯酚/氯仿法 | 第26-28页 |
| ·SDS法 | 第28-29页 |
| ·基因组DNA提取试剂盒法 | 第29-30页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第30页 |
| ·模板DNA准备 | 第30页 |
| ·大腹园蛛主壶腹腺体总RNA的提取 | 第30-32页 |
| ·实验准备 | 第30-31页 |
| ·总RNA的提取 | 第31页 |
| ·甲醛变性电泳 | 第31-32页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第32-33页 |
| ·长距离PCR反应的确立 | 第32页 |
| ·长距离PCR反应体系的优化 | 第32页 |
| ·长距离PCR反应条件的优化 | 第32-33页 |
| ·反转录聚合酶链式反应 | 第33-34页 |
| ·RT反应体系的优化 | 第33页 |
| ·RT反应条件的优化 | 第33页 |
| ·PCR反应的优化 | 第33-34页 |
| ·目的片段的琼脂糖凝胶回收 | 第34-35页 |
| ·连接反应 | 第35页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·质粒的转化 | 第36-37页 |
| ·转化子的筛选 | 第37页 |
| ·质粒的提取 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第38页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第38页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第38页 |
| ·序列测定 | 第38页 |
| ·序列分析 | 第38-39页 |
| ·表达载体pET-RS2的构建 | 第39-40页 |
| ·获取pET32a(+)载体的双酶切回收片段 | 第39页 |
| ·引物的设计与合成 | 第39页 |
| ·获取目的基因的双酶切回收片段 | 第39页 |
| ·连接反应 | 第39-40页 |
| ·转化子的筛选 | 第40页 |
| ·重组质粒pET-RS2测序鉴定 | 第40页 |
| ·实验流程 | 第40-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-62页 |
| ·大腹园蛛主壶腹腺体的解剖分离 | 第42-43页 |
| ·大腹园蛛拖丝蛋白基因AvDS1(Araneus ventricosus dragline silk DNA 1)的克隆 | 第43-52页 |
| ·大腹园蛛主壶腹腺体的基因组DNA的提取 | 第43-44页 |
| ·扩增引物的设计与合成 | 第44-45页 |
| ·聚合酶链式反应的优化 | 第45-46页 |
| ·与载体的连接反应 | 第46页 |
| ·重组质粒pD-AvDS1的PCR鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组质粒pD-AvDS1的酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·测序结果及序列分析 | 第48-52页 |
| ·AvDS1拖丝蛋白基因序列 | 第48-49页 |
| ·AvDS1拖丝蛋白氨基酸序列 | 第49-50页 |
| ·AvDS1拖丝蛋白基因序列的重复性结构特点 | 第50页 |
| ·AvDS1拖丝蛋白氨基酸序列的重复性结构特点 | 第50-51页 |
| ·AvDS1拖丝蛋白氨基酸序列motif的结构特点 | 第51页 |
| ·AvDS1拖丝蛋白基因序列检索和分析结果 | 第51-52页 |
| ·大腹园蛛拖丝蛋白基因AvRS2(Araneus ventricosus dragline silk mRNA2)的克隆 | 第52-59页 |
| ·大腹园蛛主壶腹腺体的总RNA的提取 | 第52页 |
| ·引物的设计与合成 | 第52-53页 |
| ·反转录聚合酶链式反应的优化 | 第53-54页 |
| ·与载体的连接反应 | 第54页 |
| ·重组质粒pD-AvRS2的PCR鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组质粒pD-AvRS2的酶切鉴定 | 第55页 |
| ·测序结果及序列分析 | 第55-59页 |
| ·AvRS2拖丝蛋白基因序列 | 第55-56页 |
| ·AvRS2拖丝蛋白氨基酸序列 | 第56页 |
| ·AvRS2拖丝蛋白氨基酸序列motif的结构特点 | 第56-57页 |
| ·AvRS2拖丝蛋白基因序列检索和分析结果 | 第57-59页 |
| ·大腹园蛛拖丝蛋白基因表达载体的构建 | 第59-62页 |
| ·含有大腹园蛛拖丝蛋白一段基因的获得 | 第59页 |
| ·重组质粒pET-RS2的获得 | 第59-60页 |
| ·重组质粒pET-RS2的酶切鉴定 | 第60页 |
| ·重组质粒pET-RS2的测序 | 第60-61页 |
| ·表达载体的构建图 | 第61-62页 |
| 第四章 讨论 | 第62-66页 |
| ·对AvDS1克隆的分析 | 第63-64页 |
| ·对AvRS2克隆的分析 | 第64-65页 |
| ·大腹园蛛拖丝蛋白基因两种组分的推测 | 第65页 |
| ·大腹园蛛拖丝蛋白基因表达载体的构建 | 第65-66页 |
| 第五章 结论 | 第66-68页 |
| 1 结论 | 第66页 |
| 2 创新点 | 第66-67页 |
| 3 难点 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 英文缩写词 | 第73-74页 |
| 在学期间参与的研究项目和发表的文章 | 第74页 |
