| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1 植物组织培养应用领域的研究进展 | 第14-18页 |
| ·影响药用植物组织培养生产次生代谢产物的主要因素 | 第14-16页 |
| ·在植物育种上的应用研究 | 第16-18页 |
| ·无糖培养技术 | 第18页 |
| 2 喜树碱概述 | 第18-22页 |
| ·喜树碱的发现 | 第18页 |
| ·喜树碱的作用机理 | 第18-20页 |
| ·喜树碱的应用 | 第20页 |
| ·喜树碱的生物合成途径及关键酶G10H 基因 | 第20-22页 |
| 3 本论文研究的目的及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-34页 |
| 1 实验材料 | 第24-25页 |
| ·材料的选择 | 第24页 |
| ·质粒及菌种 | 第24页 |
| ·购买的试剂、酶及药品 | 第24页 |
| ·常用试剂 | 第24-25页 |
| 2 培养基及培养条件 | 第25页 |
| 3 实验方法 | 第25-34页 |
| ·日本蛇根草叶片再生体系的建立 | 第25-28页 |
| ·材料的准备及表面消毒 | 第25页 |
| ·愈伤组织的形成和芽的分化 | 第25-27页 |
| ·愈伤组织诱导条件的研究 | 第25-26页 |
| ·愈伤组织增殖条件的研究 | 第26页 |
| ·愈伤不定芽分化条件的研究 | 第26页 |
| ·叶片不定芽分化条件的研究 | 第26-27页 |
| ·芽的增殖和壮芽培养 | 第27-28页 |
| ·芽增殖条件的研究 | 第27页 |
| ·壮芽培养条件的研究 | 第27-28页 |
| ·生根条件的研究 | 第28页 |
| ·炼苗移栽 | 第28页 |
| ·定量指标 | 第28页 |
| ·日本蛇根草G10H 基因3’端的克隆和叶片遗传转化的预试验 | 第28-34页 |
| ·RNA 的提取及检测 | 第28-30页 |
| ·准备工作 | 第28-29页 |
| ·TRIzol法抽提RNA | 第29页 |
| ·检测 RNA 的质量与纯度 | 第29-30页 |
| ·G10H 基因3’端的克隆及序列分析 | 第30-33页 |
| ·3’cDNA 的合成 | 第30页 |
| ·G10H 基因3’端的克隆 | 第30-31页 |
| ·凝胶电泳条带的柱层析纯化回收 | 第31-32页 |
| ·DNA 回收片段与pMD18-T vector 载体的连接 | 第32页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·连接产物转化DH5α感受态细胞 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆的筛选及测序鉴定 | 第33页 |
| ·G10H 3’端序列分析 | 第33页 |
| ·潮霉素对叶片不定芽分化的影响 | 第33页 |
| ·头孢霉素对叶片不定芽分化的影响 | 第33-34页 |
| 第三章 结果与分析 | 第34-50页 |
| 1 日本蛇根草叶片再生体系的建立 | 第34-46页 |
| ·升汞的处理时间对叶片消毒的影响 | 第34页 |
| ·愈伤组织诱导条件的研究 | 第34-36页 |
| ·生长素的种类及浓度对叶片愈伤组织诱导的影响 | 第34-35页 |
| ·光照时间对叶片愈伤组织诱导的影响 | 第35-36页 |
| ·愈伤组织增殖培养的研究 | 第36-37页 |
| ·基本培养基对愈伤组织增殖的影响 | 第36页 |
| ·培养时间对愈伤组织增殖的影响 | 第36-37页 |
| ·愈伤不定芽分化条件的研究 | 第37-38页 |
| ·愈伤组织的诱导时间对愈伤不定芽分化的影响 | 第37页 |
| ·愈伤组织的继代次数对愈伤不定芽分化的影响 | 第37-38页 |
| ·叶片不定芽分化条件的研究 | 第38-41页 |
| ·植物激素组合对叶片不定芽分化的影响 | 第38-39页 |
| ·植物激素组合对叶片不定芽分化的优化 | 第39页 |
| ·基本培养基对叶片不定芽分化的影响 | 第39页 |
| ·苗龄对叶片不定芽分化的影响 | 第39-40页 |
| ·PVP 浓度对叶片不定芽分化的影响 | 第40-41页 |
| ·暗培养时间对叶片不定芽分化的影响 | 第41页 |
| ·芽增殖条件的研究 | 第41-43页 |
| ·基本培养基对芽增殖的影响 | 第41页 |
| ·BA、KT 及 NAA 的组合对芽增殖的影响 | 第41-43页 |
| ·壮芽培养条件的研究 | 第43-45页 |
| ·KT、LH 及 CH 的组合对日本蛇根草芽长的影响 | 第43页 |
| ·KT、LH 及 CH 的组合对日本蛇根草茎粗的影响 | 第43-44页 |
| ·KT、LH 及 CH 的组合对日本蛇根草叶数的影响 | 第44-45页 |
| ·KT、LH 及 CH 的组合对日本蛇根草叶长的影响 | 第45页 |
| ·生根培养条件的研究 | 第45-46页 |
| ·炼苗移栽 | 第46页 |
| 2 日本蛇根草G10H 基因3’端的克隆和叶片遗传转化的预试验 | 第46-50页 |
| ·RNA 的提取及检测 | 第46页 |
| ·G10H基因3’端的克隆及序列分析 | 第46-48页 |
| ·潮霉素对叶片不定芽分化的影响 | 第48-49页 |
| ·头孢霉素对叶片不定芽分化的影响 | 第49-50页 |
| 第四章 问题与讨论 | 第50-54页 |
| 1 外植体的消毒 | 第50页 |
| 2 外植体的褐变 | 第50-51页 |
| 3 愈伤继代增殖培养 | 第51页 |
| 4 初期暗培养 | 第51-52页 |
| 5 正交试验 | 第52页 |
| 6 RACE 技术 | 第52-53页 |
| 7 抑菌剂的选择 | 第53-54页 |
| 第五章 总结 | 第54-56页 |
| 1 研究结论 | 第54-55页 |
| 2 本研究的主要创新点 | 第55页 |
| 3 下一步工作的内容 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
| 附录1：图片与说明 | 第66-67页 |
| 附录2：攻读硕士学位期间发表的论文 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
