| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-22页 |
| ·B. subtilis的核黄素生物合成 | 第8-12页 |
| ·核黄素生物合成途径 | 第8-10页 |
| ·B. subtilis的核黄素操纵子 | 第10-11页 |
| ·核黄素操纵子的表达调控机制 | 第11-12页 |
| ·产核黄素的B. subtilis 基因工程菌 | 第12-13页 |
| ·ccpA基因与CCR效应 | 第13-16页 |
| ·ccpA基因及其功能 | 第13-14页 |
| ·CCR效应对中心碳代谢的影响 | 第14-15页 |
| ·CCR效应对核黄素发酵的影响 | 第15-16页 |
| ·影响B. subtilis基因表达的主要因素 | 第16-19页 |
| ·σ因子 | 第16-17页 |
| ·启动子 | 第17-18页 |
| ·m RNA的前导区 | 第18-19页 |
| ·起始密码子 | 第19页 |
| ·终止子 | 第19页 |
| ·常用的B.subtilis基因表达方式及存在问题 | 第19-21页 |
| ·游离质粒表达 | 第19-20页 |
| ·整合质粒表达 | 第20-21页 |
| ·存在的问题 | 第21页 |
| ·本文的研究内容和目的 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-34页 |
| ·实验材料 | 第22-26页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·主要药品 | 第22-23页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-32页 |
| ·B. subtilis出发菌株的筛选 | 第26-27页 |
| ·B. subtilis生长曲线的测定 | 第27页 |
| ·B. subtilis染色体DNA提取 | 第27页 |
| ·质粒的小规模提取 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增 | 第28页 |
| ·重叠PCR | 第28-29页 |
| ·酚抽提和乙醇沉淀 | 第29-30页 |
| ·DNA片段的回收纯化 | 第30页 |
| ·DNA的酶切 | 第30页 |
| ·DNA连接反应 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第31页 |
| ·B.subtilis 24 原生质体的制备与转化 | 第31-32页 |
| ·B.subtilis 168 Spizzen转化 | 第32页 |
| ·PCR和重叠PCR扩增的引物 | 第32-34页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第34-54页 |
| ·ccpA基因表达元件的分析 | 第34-39页 |
| ·ccpA基因的启动子分析 | 第34-36页 |
| ·ccpA基因m RNA前导序列的特征分析 | 第36页 |
| ·ccpA基因的终止子分析 | 第36-39页 |
| ·B. subtilis 24 recA基因的恢复和重组能力研究 | 第39-43页 |
| ·B. subtilis 24 recA基因恢复 | 第39-40页 |
| ·B. subtilis 24Y1 的生长特性和产核黄素能力 | 第40-42页 |
| ·B. subtilis 24 Y1 重组能力测定 | 第42-43页 |
| ·ribAH基因的点突变 | 第43-46页 |
| ·重叠PCR构建ribAH点突变片段 | 第44-45页 |
| ·ribAH突变株的构建 | 第45-46页 |
| ·ribAH基因的插入失活 | 第46-50页 |
| ·pUC-H质粒的构建 | 第47-48页 |
| ·pUC-ACH质粒的构建 | 第48-49页 |
| ·ribAH的插入失活菌株的构建 | 第49-50页 |
| ·ribAH结构基因在ccpA位点的整合 | 第50-54页 |
| ·ribAH整合片段的构建 | 第50-51页 |
| ·转化与转化子筛选 | 第51-52页 |
| ·转化子的鉴定 | 第52-54页 |
| 第四章 结论与展望 | 第54-55页 |
| ·主要结论 | 第54页 |
| ·展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
