| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 第一部分 研究背景 | 第16-26页 |
| 1 骨骼肌卫星细胞 | 第16-18页 |
| ·骨骼肌卫星细胞简介 | 第16页 |
| ·骨骼肌卫星细胞培养方法及研究进展 | 第16-18页 |
| 2 MEF2基因家族 | 第18-23页 |
| ·MEF2基因家族简介 | 第18-19页 |
| ·MEF2与肌肉的发生 | 第19-20页 |
| ·MEF2基因家族研究进展 | 第20-23页 |
| ·MEF2基因的表达调控 | 第20页 |
| ·MEF2蛋白的活性调控 | 第20-22页 |
| ·钙调素一钙调磷酸酶通路 | 第20-21页 |
| ·TGF-Smad通路 | 第21页 |
| ·MEF2的结合蛋白 | 第21-22页 |
| ·MEF2的靶基因 | 第22-23页 |
| 3 分子标记 | 第23-26页 |
| ·以分子杂交为基础的Ⅰ类分子标记 | 第23页 |
| ·基于PCR技术的Ⅱ类标记 | 第23-24页 |
| ·以测序为核心的Ⅲ类分子标记 | 第24-26页 |
| 第二部分 研究目的和意义 | 第26-27页 |
| 第三部分 猪骨骼肌卫星细胞的培养、鉴定及生物特性分析 | 第27-44页 |
| 1 前言 | 第27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-37页 |
| ·实验材料 | 第27-31页 |
| ·实验动物 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·培养器具 | 第28页 |
| ·器械的清洗和消毒 | 第28-29页 |
| ·主要试剂的配制 | 第29-31页 |
| ·骨骼肌卫星细胞的培养方法 | 第31-35页 |
| ·培养瓶包被 | 第31页 |
| ·原代细胞的获取与培养 | 第31-32页 |
| ·生长培养基的最佳血清浓度的确定 | 第32页 |
| ·胰酶最佳消化时间的确定 | 第32页 |
| ·鸡胚提取液是否对细胞生长有作用 | 第32页 |
| ·细胞的传代培养 | 第32页 |
| ·骨骼肌卫星细胞生长曲线的绘制 | 第32-33页 |
| ·诱导分化及细胞形态观察 | 第33-34页 |
| ·细胞的冻存 | 第34-35页 |
| ·细胞的复苏 | 第35页 |
| ·骨骼肌卫星细胞的鉴定 | 第35-37页 |
| ·RT-PCR初步鉴定 | 第35-36页 |
| ·免疫细胞化学染色鉴定 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-41页 |
| ·生长培养基的最佳血清浓度 | 第37页 |
| ·胰酶最佳消化时间的确定 | 第37页 |
| ·鸡胚提取液对细胞生长有促进作用 | 第37页 |
| ·骨骼肌卫星细胞的形态 | 第37-38页 |
| ·生长曲线 | 第38页 |
| ·骨骼肌卫星细胞的分化 | 第38-39页 |
| ·骨骼肌卫星细胞的复苏 | 第39页 |
| ·卫星细胞的鉴定结果 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| ·骨骼肌卫星细胞的分离与纯化 | 第41页 |
| ·骨骼肌卫星细胞的体外培养及生长特性 | 第41-42页 |
| ·骨骼肌卫星细胞的分化与鉴定 | 第42-43页 |
| ·体外培养骨骼肌卫星细胞的应用前景 | 第43-44页 |
| 第四部分 猪MEF2家族基因的克隆及其在骨骼肌细胞体外分化过程中的表达模式研究 | 第44-68页 |
| 1 前言 | 第44页 |
| 2 材料与方法 | 第44-53页 |
| ·材料 | 第44-46页 |
| ·样品 | 第44页 |
| ·DNA样品 | 第44页 |
| ·组织样品 | 第44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44-45页 |
| ·主要试剂及配制 | 第45-46页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要试剂配制 | 第45-46页 |
| ·主要分子生物学软件和统计软件 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-53页 |
| ·猪MEF2B和MEF2C基因的分离方法 | 第46-51页 |
| ·猪EST信息的获取和整理 | 第46-47页 |
| ·引物设计 | 第47页 |
| ·总RNA的提取、检测、DNase-Ⅰ处理及纯化 | 第47-48页 |
| ·RNA的反转录(Reverse transcription RT) | 第48页 |
| ·双链全长cDNA的合成 | 第48-50页 |
| ·PCR扩增条件 | 第50页 |
| ·PCR产物的纯化、克隆和测序 | 第50-51页 |
| ·cDNA序列同源性检索及序列分析 | 第51页 |
| ·猪MEF2B基因多态性和遗传方式分析 | 第51-52页 |
| ·猪MEF2B基因第2内含子的多态性PCR-RFLP分析 | 第51页 |
| ·猪MEF2B基因第8内含子的多态性PCR-SSR分析 | 第51页 |
| ·多态标记与性状的关联分析方法 | 第51-52页 |
| ·MEF2B和MEF2C表达模式研究 | 第52-53页 |
| ·MEF2B和MEF2C基因的组织表达谱研究 | 第52页 |
| ·MEF2B和MEF2C基因在骨骼肌细胞体外分化过程中的表达模式研究 | 第52-53页 |
| 3 试验结果 | 第53-63页 |
| ·猪总的RNA的提取及反转录 | 第53页 |
| ·猪MEF2C基因编码区的分离 | 第53-54页 |
| ·猪MEF2B基因5' RACE结果 | 第54-55页 |
| ·猪MEF2B基因部分编码区的分离 | 第55-56页 |
| ·猪MEF2B和MEF2B基因序列的生物信息学分析 | 第56-59页 |
| ·猪MEF2B和MEF2C基因的表达模式研究 | 第59-60页 |
| ·猪MEF2B和MEF2C基因的组织表达谱分析 | 第59页 |
| ·猪MEF2B和MEF2C基因在骨骼肌卫星细胞分化中的表达模式 | 第59-60页 |
| ·猪MEF2B基因的遗传变异与遗传方式的检测结果 | 第60-63页 |
| ·猪MEF2B基因第2内含子SNP检测与性状关联分析 | 第60-61页 |
| ·猪MEF2B基因第2内含子突变的发现 | 第60页 |
| ·猪MEF2B基因的第2内含子的Eco721酶切位点多态性的检测结果 | 第60-61页 |
| ·猪MEF2B基因第8内含子微卫星的发现及大白×梅山F2代资源家系中的性状关联分析 | 第61-63页 |
| ·猪MEF2B基因第8内含子微卫星的发现 | 第61页 |
| ·猪MEF2B基因第8内含子微卫星在大白×梅山F2代资源家系中的性状关联分析 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-68页 |
| ·根据EST分离基因的策略 | 第63-64页 |
| ·总RNA的提取及RACE质量分析 | 第64页 |
| ·MEF2B和MEF2C序列及结构分析 | 第64-65页 |
| ·MEF2B和MEF2C表达模式研究 | 第65-66页 |
| ·MEF2B基因和部分经济性状的初步关联分析 | 第66-67页 |
| ·为什么要选择猪骨骼肌卫星细胞为模型研究MEF2的表达模式 | 第67-68页 |
| 第五部分 其他相关基因的研究工作 | 第68-72页 |
| 1 猪CACNG1基因的克隆 | 第68-69页 |
| 2 猪FHL3基因在骨骼肌卫星细胞体外分化中的表达研究 | 第69-72页 |
| 小结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 论文发表情况 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
