| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-36页 |
| 第一章 传染性法氏囊病病毒研究进展 | 第12-36页 |
| 1 IBDV的一般生物学特征 | 第12-13页 |
| ·IBDV的分类和地位 | 第12页 |
| ·IBDV的理化特性 | 第12页 |
| ·IBDV的细胞培养特征 | 第12-13页 |
| ·IBDV的流行病学特征 | 第13页 |
| 2 IBDV的分子生物学特征 | 第13-27页 |
| ·IBDV的形态与结构 | 第13-15页 |
| ·IBDV的基因组结构及编码的蛋白 | 第15-22页 |
| ·基因组非编码区 | 第15-16页 |
| ·IBDV的基因组编码区 | 第16-22页 |
| ·IBDV抗原与毒力变异的分子机制 | 第22-24页 |
| ·IBDV的复制和繁殖 | 第24-25页 |
| ·IBDV新型疫苗的研究 | 第25-27页 |
| ·IBDV基因工程疫苗的研究 | 第25-27页 |
| ·IBDVDNA疫苗的研究 | 第27页 |
| 3 IBDV的检测技术 | 第27-29页 |
| ·ELISA检测技术 | 第28页 |
| ·PCR检测技术 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-36页 |
| 第二部分 研究内容 | 第36-68页 |
| 第一章 染性法氏囊病病毒野毒株的分离及鉴定 | 第37-42页 |
| 1 材料 | 第37-38页 |
| ·病料及处理 | 第37-38页 |
| ·标准IBD阳性抗原和血清 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38页 |
| ·琼脂免疫扩散试验 | 第38页 |
| ·鸡胚接种及传代 | 第38页 |
| ·电镜观察 | 第38页 |
| ·组织病理学观察 | 第38页 |
| 3 结果 | 第38-40页 |
| ·琼脂扩散试验 | 第38-39页 |
| ·病毒对鸡胚的致病性 | 第39页 |
| ·组织病理学观察结果 | 第39-40页 |
| ·电镜观察结果 | 第40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-42页 |
| 第二章 传染性法氏囊病病毒(TL2004株)全基因组的克隆 | 第42-52页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| ·质粒与菌株 | 第42-43页 |
| ·试验用毒株 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-47页 |
| ·IBDV基因组的提取与纯化 | 第43-44页 |
| ·蛋白酶K法提取TL2004株基因组RNA | 第43页 |
| ·病毒dsRNA的纯化 | 第43-44页 |
| ·引物设计和合成 | 第44页 |
| ·Long-accurate RT-PCR扩增基因组全长cDNA | 第44-45页 |
| ·Long-accurate RT-PCR扩增基因组A节段全长cDNA | 第44页 |
| ·Long-accurate RT-PCR扩增基因组A节段全长cDNA | 第44-45页 |
| ·IBDV基因组A节段全长cDNA的克隆策略 | 第45-47页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·低熔点胶回收PCR产物 | 第45页 |
| ·连接反应 | 第45-46页 |
| ·转化 | 第46页 |
| ·提取质粒DNA | 第46页 |
| ·基因组A和B节段全长cDNA限制性酶切 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第47页 |
| ·序列测定 | 第47页 |
| 3 结果 | 第47-50页 |
| ·病毒基因组的提取 | 第47页 |
| ·IBDV基因组A和B节段的克隆与鉴定 | 第47-48页 |
| ·LA-PCR扩增基因组A节段全长cDNA | 第47-48页 |
| ·LA-PCR扩增基因组B节段全长cDNA | 第48页 |
| ·IBDV全基因组的克隆 | 第48-50页 |
| ·IBDV全基因组A节段全长的克隆 | 第48-49页 |
| ·IBDV全基因组B节段全长的克隆 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-52页 |
| 第三章 传染性法氏囊病病毒(TL2004株)基因组全长的生物信息学分析 | 第52-68页 |
| 1 材料和方法 | 第53页 |
| 2 结果 | 第53-64页 |
| ·全基因组5’-NCR和3’-NCR | 第53-57页 |
| ·VP1蛋白毒力位点的分析 | 第57-58页 |
| ·ORF2及编码的VP5蛋白 | 第58-60页 |
| ·多聚蛋白VP2/VP4/VP3 | 第60-61页 |
| ·进化树分析 | 第61-64页 |
| 3 讨论 | 第64-66页 |
| ·IBDV A节段和B节段5’-NCR和3’-NCR的结构与功能 | 第64页 |
| ·关于IBDV抗原变异和毒力变异的分子基础 | 第64-66页 |
| ·关于TL2004株与其它毒株的亲缘关系分析 | 第66页 |
| 参考文献 | 第66-68页 |
| 附录1 常用试剂及材料 | 第68-71页 |
| 附录2 硕士期间发表或录用论文 | 第71-72页 |
| 附 重组共表达载体PIL-18-IRES-IL-2的构建及在CEF细胞中的表达 | 第72-78页 |
| 1 材料 | 第74页 |
| ·质粒和菌株 | 第74页 |
| ·主要试剂 | 第74页 |
| 2 方法 | 第74-75页 |
| ·引物设计 | 第74页 |
| ·CEF制备 | 第74页 |
| ·真核共表达质粒pIL-18-IRES-IL-2的构建 | 第74-75页 |
| ·重组质粒的细胞转染及表达 | 第75页 |
| 3 结果 | 第75-77页 |
| ·引物设计和PCR扩增目的基因 | 第75-76页 |
| ·真核共表达质粒pIL-18-IRES-IL-2的构建 | 第76页 |
| ·RT-PCR检测基因转录 | 第76页 |
| ·真核共表达质粒在CEF细胞中的瞬时表达 | 第76-77页 |
| 4 讨论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-79页 |
| 附录3 致谢 | 第79页 |
