| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| 1 纤维素的研究进展 | 第12-14页 |
| ·纤维素的分子结构 | 第12-13页 |
| ·纤维素底物类型 | 第13-14页 |
| ·可溶性纤维素底物 | 第13页 |
| ·不溶性纤维素底物 | 第13-14页 |
| 2 纤维素酶的研究进展 | 第14-18页 |
| ·纤维素酶的来源 | 第14页 |
| ·纤维素酶的组成和作用机制 | 第14-15页 |
| ·纤维素酶的分子结构 | 第15-16页 |
| ·纤维素酶的分子酶工程研究进展 | 第16-18页 |
| 3 大肠杆菌表达系统研究进展 | 第18-21页 |
| ·大肠杆菌表达系统的特点 | 第18页 |
| ·大肠杆菌的基因工程 | 第18-21页 |
| ·大肠杆菌的组成 | 第18-20页 |
| ·外源基因的融合表达 | 第20-21页 |
| 4 巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 | 第21-25页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优点 | 第21-22页 |
| ·在酵母表达载体中高效表达外源基因的策略 | 第22-23页 |
| ·毕赤酵母的组成 | 第22-23页 |
| ·利用酵母菌表达外源基因的步骤 | 第23页 |
| ·酵母表达载体中高效表达外源基因的策略 | 第23-25页 |
| 第二章 异源重构内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达研究 | 第25-50页 |
| 1 材料 | 第25-28页 |
| ·菌株与载体 | 第25页 |
| ·试剂与溶液 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·常用缓冲液及其抗生素的配制 | 第26-28页 |
| ·内切葡聚糖酶酶活力测定的溶液配置 | 第26-27页 |
| ·抗生素贮存液的配制 | 第27页 |
| ·主要的琼脂糖电泳试剂 | 第27-28页 |
| ·刚果红染色液 | 第28页 |
| 2 实验方法 | 第28-38页 |
| ·重组表达载体构建 | 第28-35页 |
| ·内切葡聚糖酶基因和真菌基因(FCBD)片段的准备 | 第28-32页 |
| ·表达载体片段的准备 | 第32-33页 |
| ·载体连接 | 第33页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·转化 | 第34页 |
| ·阳性克隆子的筛选及鉴定 | 第34-35页 |
| ·重构体菌株的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·重构体菌株的IPTG诱导 | 第35-36页 |
| ·重构体菌株的水解圈分析 | 第36页 |
| ·重构酶的SDS-PAGE分析 | 第36页 |
| ·重构体酶的酶学性质分析 | 第36-38页 |
| ·重构酶活性的测定方法 | 第36-37页 |
| ·重构酶的最适温度的测定 | 第37页 |
| ·重构酶的最适pH值的测定 | 第37页 |
| ·重构酶热稳定性的测定 | 第37页 |
| ·重构酶pH稳定性的测定 | 第37-38页 |
| ·不同诱导温度对酶活力的影响 | 第38页 |
| ·诱导时间对重构酶活力的影响 | 第38页 |
| ·重构酶用不同IPTG诱导浓度对酶活力的影响 | 第38页 |
| 3 实验结果 | 第38-48页 |
| ·高保真酶扩增结构域编码基因片段序列 | 第38-40页 |
| ·重构表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·重构体的IPTG诱导表达及水解圈活性分析 | 第41-43页 |
| ·重构酶的IPTG诱导表达 | 第41-42页 |
| ·重构酶的水解圈分析 | 第42页 |
| ·重构酶的SDS-PAGE分析 | 第42-43页 |
| ·重构体酶的酶学性质分析 | 第43-48页 |
| ·重构酶的最适温度的测定 | 第43-44页 |
| ·重构酶的最适pH值的测定 | 第44-45页 |
| ·重构酶热稳定性的测定 | 第45页 |
| ·重构酶的pH值稳定性的测定 | 第45-46页 |
| ·最适诱导温度 | 第46页 |
| ·诱导时间对重构酶活力的影响 | 第46-47页 |
| ·重构酶用同IPTG诱导浓度对酶活力的影响 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 内切葡聚糖酶结构域异源重构与同源重构研究 | 第50-71页 |
| 1 材料 | 第50-53页 |
| ·菌株与载体 | 第50-51页 |
| ·试剂与溶液 | 第51-52页 |
| ·各种母液的配制 | 第51-52页 |
| ·各种培养基的配制 | 第52页 |
| ·主要仪器 | 第52-53页 |
| 2 方法 | 第53-58页 |
| ·异源重构基因重组表达载体构建 | 第53-56页 |
| ·异源重构各结构域片段准备 | 第53-54页 |
| ·表达载体片段的准备 | 第54-55页 |
| ·表达载体连接 | 第55页 |
| ·大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备 | 第55页 |
| ·转化 | 第55页 |
| ·阳性克隆子的筛选及鉴定 | 第55-56页 |
| ·异源重构重组表达载体的电击转化 | 第56-57页 |
| ·线性化重组表达载体 | 第56页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞GS115的制备 | 第56页 |
| ·毕赤酵母的电击转化 | 第56-57页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第57页 |
| ·高效表达酵母重构菌株的筛选 | 第57页 |
| ·异源重构体酶的SDS-PAGE分析 | 第57页 |
| ·经同源重构和异源重构后重组酵母的酶学性质分析 | 第57-58页 |
| ·重构酶的最适温度的测定 | 第57-58页 |
| ·重构体酶的最适pH值的测定 | 第58页 |
| ·重构酶热稳定性的测定 | 第58页 |
| ·重构酶pH稳定性的测定 | 第58页 |
| 3 结果 | 第58-67页 |
| ·异源重构各结构域基因片段的高保真酶扩增 | 第58-59页 |
| ·异源重构基因重组表达载体构建 | 第59-61页 |
| ·异源重构体酶重组酵母的诱导表达 | 第61-63页 |
| ·重构体酶的高表达菌株筛选 | 第61-62页 |
| ·重构体酶的SDS-PAGE分析 | 第62-63页 |
| ·异源重构体重组酶酶学性质分析 | 第63-67页 |
| ·重构体酶最适反应温度 | 第63-64页 |
| ·重构体酶最适反应pH | 第64-65页 |
| ·重构体酶的温度稳定性分析 | 第65-66页 |
| ·重构体酶pH稳定性 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 致谢 | 第76页 |