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鸡钙代谢调节相关基因的克隆重组与表达研究

摘要第1-12页
ABSTRAC第12-16页
前言第16-18页
第一部分 文献综述第18-54页
 1 钙代谢调控研究进展第19-37页
   ·研究动物体内钙代谢调控的意义第19-22页
     ·促进营养学科的发展第19-20页
     ·为动物遗传育种提供新的研究方向第20页
     ·提高动物的繁殖力第20-21页
     ·有利于疾病控制技术的研究第21-22页
   ·钙代谢的整体调节第22-26页
     ·钙代谢的营养生理调节第22-24页
       ·食物及消化道因素对钙代谢的影响第22-23页
       ·维生素D与钙代谢间的关系第23-24页
     ·钙代谢的内分泌调控第24-26页
       ·PTH与钙代谢第24页
       ·CT与钙代谢第24页
       ·性激素与钙代谢第24-26页
     ·影响钙代谢的其它因素第26页
   ·钙代谢的基因调控第26-30页
   ·本章小结第30页
  参考文献:第30-37页
 2 基因治疗及其在骨钙代谢性疾病防治中的应用第37-54页
   ·基因治疗的概念与分类第37-39页
     ·基因治疗第37页
     ·基因治疗的分类第37-39页
       ·基因矫正第38页
       ·基因置换第38页
       ·基因增强第38-39页
       ·基因调节第39页
   ·基因治疗技术研究内容与应用前景第39-43页
     ·研究内容第39-42页
       ·基因导入技术第39-40页
       ·治疗基因运送载体的研究第40-41页
       ·基因治疗靶细胞的选择第41页
       ·基因治疗的靶向性第41-42页
     ·基因治疗的临床应用前景第42-43页
   ·基因治疗在骨科疾病防治中的应用第43-47页
     ·骨愈合的基因治疗第44-45页
     ·关节和软骨的基因治疗第45-46页
     ·椎间盘疾病的基因治疗第46页
     ·肌键和韧带的基因治疗第46-47页
     ·骨钙代谢性疾病的基因治疗第47页
   ·本章小结第47-48页
  参考文献第48-54页
第二部分 实验研究第54-118页
 3 鸡钙代谢调节相关基因的克隆与测序第55-73页
   ·实验一:降钙素基因的克隆与序列分析第55-60页
     ·材料与方法第55-57页
       ·材料第55-56页
       ·方法第56-57页
     ·实验结果与分析第57-59页
       ·总RNA提取结果第57页
       ·应用RT-PCR扩增cCT基因第57页
       ·重组体的筛选第57-58页
       ·测序结果第58页
       ·同源性比较第58页
       ·种属间比较第58-59页
     ·讨论第59-60页
   ·实验二:甲状旁腺激素基因的克隆与序列分析第60-64页
     ·材料与方法第60-61页
       ·材料第60页
       ·方法第60-61页
     ·结果与分析第61-63页
       ·总RNA提取结果第61页
       ·RT-PCR产物电泳分析第61-62页
       ·RT-PCR产物克隆第62页
       ·鸡甲状旁腺素cDNA序列分析第62-63页
       ·种属间PTH基因氨基酸序列分析第63页
     ·讨论第63-64页
   ·实验三:鸡CABP-D28K基因的克隆与序列分析第64-70页
     ·材料与方法第64-65页
       ·材料第64页
       ·方法第64-65页
     ·结果与分析第65-68页
       ·总RNA的提取第65页
       ·PCR产物电泳分析第65-66页
       ·PCR产物的克隆第66-67页
       ·测序结果第67页
       ·序列分析第67页
       ·种属间CaBP-D28k氨基酸同源性比较第67-68页
       ·种属CaBP-D28k进化树第68页
       ·种属CaBP-D28k氨基酸序列比较第68页
     ·讨论第68-70页
   ·本章小结第70页
  参考文献第70-73页
 4 鸡钙代谢调节相关基因真核表达质粒的构建第73-91页
   ·实验四鸡降钙素基因真核表达质粒的构建第73-78页
     ·材料与方法第73-76页
       ·材料第73页
       ·方法第73-76页
     ·结果与分析第76-77页
       ·重组真核表达质粒的筛选第76页
       ·重组真核表达质粒酶切结果第76-77页
       ·重组真核表达质粒的PCR鉴定第77页
     ·讨论第77-78页
   ·实验五:鸡甲状旁腺激素基因真核表达质粒的构建第78-82页
     ·材料与方法第78-80页
       ·材料第78页
       ·方法第78-80页
     ·结果第80-81页
       ·真核表达质粒pcDNA3-PTH构建鉴定第80-81页
       ·真核表达质粒pCEP4-PTH构建鉴定第81页
     ·讨论第81-82页
   ·实验六:鸡CABP-D28K重组真核表达质粒的构建第82-86页
     ·材料与方法第82-85页
       ·材料第82页
       ·方法第82-85页
     ·结果与分析第85-86页
       ·重组质粒的PCR鉴定第85页
       ·重组质粒的酶切分析第85-86页
     ·讨论第86页
   ·实验七:鸡CABP-D28K重组真核表达质粒的细胞表达第86-88页
     ·材料与方法第86-87页
       ·材料第86页
       ·重组质粒在COS-Ⅰ细胞中的表达方法第86-87页
     ·讨论第87-88页
   ·本章小结第88-89页
  参考文献第89-91页
 5 钙代谢调节相关基因真核表达质粒在蛋鸡体内的表达及其对钙代谢的调节第91-118页
   ·实验八:鸡降钙素CDNA在蛋鸡体内的表达第91-99页
     ·材料与方法第91-93页
       ·材料第91-92页
       ·方法第92-93页
     ·实验结果与分析第93-97页
       ·血清中降钙素水平的变化第93-94页
       ·重组降钙素基因质粒对甲状旁腺素分泌的影响第94页
       ·重组鸡降钙素基因质粒对雌激素分泌的影响第94-95页
       ·重组鸡降钙素基因对血清钙磷浓度的影响第95-97页
     ·讨论第97-99页
       ·蛋鸡体内主要钙代谢调节物浓度的变化第97-98页
       ·重组基因质粒的表达效果第98-99页
   ·实验九:鸡甲状旁腺激素基因CDNA在蛋鸡体内的表达第99-106页
     ·材料与方法第99-100页
       ·材料第99页
       ·方法第99-100页
     ·结果与分析第100-104页
       ·重组质粒对鸡血清中甲状旁腺激素浓度的影响第100-101页
       ·重组质粒对鸡血清降钙素浓度的影响第101-102页
       ·注射重组质粒对鸡血清雌二醇浓度的影响第102页
       ·不同质粒对鸡血清钙磷浓度的影响第102-104页
     ·讨论第104-106页
       ·影响导入基因表达效果的因素第104-105页
       ·本实验质粒在蛋鸡体内的表达效果第105-106页
   ·实验十:鸡CABP-D28K重组质粒在蛋鸡体内的表达第106-114页
     ·材料与方法第106-107页
       ·材料第106页
       ·实验方法第106-107页
     ·结果与分析第107-111页
       ·血清钙含量的变化第107-108页
       ·血清中PTH含量的变化第108-109页
       ·血清中CT含量的变化第109-110页
       ·血清中E2含量的变化第110-111页
     ·讨论第111-114页
       ·重组CaBP-D28k质粒对鸡钙代谢的影响第111-112页
       ·其他影响钙代谢因素的探讨第112-114页
   ·本章小结第114-115页
  参考文献第115-118页
全文结论第118-119页
创新第119-120页
附录1:在读期间发表论文(著)和申请专利第120-122页
附录2:基因测序图第122-126页
致谢第126页

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