| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-27页 |
| ·引言 | 第14页 |
| ·转基因作物应用概况 | 第14-16页 |
| ·BT蛋白及其作用机制 | 第16-19页 |
| ·Bt毒素蛋白简介 | 第16-18页 |
| ·Bt毒蛋白的作用机制 | 第18-19页 |
| ·BT毒素的抗性机制 | 第19-21页 |
| ·蛋白酶调控的 Bt 抗性 | 第19-20页 |
| ·酯酶螯合及免疫反应增强 | 第20页 |
| ·结合位点的改变 | 第20页 |
| ·受体调控的抗性 | 第20-21页 |
| ·BT抗性治理的策略 | 第21-22页 |
| ·转多价基因作物策略 | 第21页 |
| ·新毒素策略 | 第21-22页 |
| ·毒素改造策略 | 第22页 |
| ·BT受体蛋白的研究进展 | 第22-26页 |
| ·钙粘蛋白 | 第22-24页 |
| ·氨肽酶 N | 第24-25页 |
| ·碱性磷酸酯酶 | 第25-26页 |
| ·本研究的内容、目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 棉铃虫CRY1AC抗性演化中的碱性磷酸酯酶的表达 | 第27-36页 |
| ·材料与方法 | 第27-31页 |
| ·供试昆虫 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·仪器设备 | 第28页 |
| ·技术路线 | 第28页 |
| ·生物测定 | 第28页 |
| ·实时定量 PCR | 第28-30页 |
| ·BBMV 上 ALP 酶活测定 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-34页 |
| ·Bt 毒素 CrylAc 对抗性和敏感品系的生物测定 | 第31-32页 |
| ·实时定量 PCR 表达量差异 | 第32-33页 |
| ·碱性磷酸酯酶酶活差异分析 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 碱性磷酸酯酶多肽片段的原核表达 | 第36-47页 |
| ·材料与方法 | 第36-43页 |
| ·供试昆虫 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36-38页 |
| ·仪器设备 | 第38-39页 |
| ·技术路线 | 第39页 |
| ·棉铃虫中肠总 RNA 的提取及 cDNA 的合成 | 第39页 |
| ·引物设计及 PCR 扩增 | 第39-40页 |
| ·产物回收及转化克隆载体 | 第40-41页 |
| ·双酶切及重组表达载体构建 | 第41页 |
| ·转入 BL21(DE3)感受态细胞及阳性克隆鉴定 | 第41-42页 |
| ·ALP 多肽片段的重组表达及纯化 | 第42页 |
| ·Western blot 分析 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-46页 |
| ·棉铃虫 ALP 基因的克隆 | 第43-44页 |
| ·目的蛋白原核表达及纯化 | 第44-45页 |
| ·Western blot 分析 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 碱性磷酸酯酶多肽片段的生测分析 | 第47-53页 |
| ·材料与方法 | 第47-49页 |
| ·供试昆虫 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·仪器设备 | 第47页 |
| ·蛋白的表达与纯化 | 第47页 |
| ·蛋白定量 | 第47-48页 |
| ·生物测定 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-51页 |
| ·不同质量比生测 | 第49-50页 |
| ·相同质量比生测 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 碱性磷酸酯酶多肽片段的功能分析 | 第53-59页 |
| ·材料与方法 | 第53-55页 |
| ·供试昆虫 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·仪器设备 | 第53页 |
| ·碱性磷酸酯酶多肽片段的表达与纯化 | 第53页 |
| ·Ligand blot 分析 | 第53-54页 |
| ·BBMV 的制备 | 第54页 |
| ·多肽片段与 BBMV 的结合分析 | 第54-55页 |
| ·碱性磷酸酯酶多肽促 Cry1Ac 寡聚体形成分析 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-57页 |
| ·表达与纯化 | 第55页 |
| ·多肽片段与毒素结合分析 | 第55-56页 |
| ·多肽片段与 BBMV 的结合分析 | 第56页 |
| ·多肽促 Cry1Ac 寡聚体形成分析 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第六章 全文结论 | 第59-61页 |
| ·主要结论 | 第59-60页 |
| ·创新点 | 第60页 |
| ·问题与展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72页 |
