反义磷脂酶D_γ基因转化白三叶草的研究
| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-26页 |
| ·植物耐盐碱、抗干旱基因工程研究进展 | 第13-21页 |
| ·耐盐、抗旱调渗物质合成基因的克隆及作用机理 | 第14-19页 |
| ·Imtl 基因 | 第14页 |
| ·mtl D 基因和gut D 基因 | 第14-15页 |
| ·ots 基因和TPS 基因 | 第15-16页 |
| ·P5cs 基因 | 第16页 |
| ·bets 基因和BADH 基因 | 第16-19页 |
| ·植物抗盐和耐旱信号传导和表达调控的研究进展 | 第19-21页 |
| ·信号传递和调控基因表达的转录因子 | 第19-20页 |
| ·感应和传导胁迫信号的蛋白激酶 | 第20-21页 |
| ·磷脂酶D(PLD)基因的作用及研究进展 | 第21-23页 |
| ·磷脂酶D 的发现和PLD 基因家族 | 第21-22页 |
| ·PLD 的生理作用 | 第22-23页 |
| ·基因工程在白三叶草育种中的应用 | 第23-24页 |
| ·选题依据 | 第24-26页 |
| ·PLD 基因在植物育种上的应用潜力 | 第24-25页 |
| ·白三叶草耐盐性研究的重要性 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-39页 |
| ·实验材料 | 第26-30页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌株和质粒 | 第26-27页 |
| ·细菌培养基 | 第27页 |
| ·植物激素和植物培养基 | 第27-28页 |
| ·植物激素 | 第27页 |
| ·植物培养基 | 第27-28页 |
| ·试剂 | 第28-30页 |
| ·抗生素 | 第28页 |
| ·植物基因组DNA 提取液 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌质粒提取缓冲液 | 第29页 |
| ·农杆菌双元载体质粒提取试剂 | 第29页 |
| ·电泳缓冲液配制 | 第29页 |
| ·Southern 杂交试剂 | 第29-30页 |
| ·酶与生化试剂 | 第30页 |
| ·PCR 引物 | 第30页 |
| ·仪器 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-39页 |
| ·白三叶草再生体系的建立 | 第30-31页 |
| ·无菌苗的获得 | 第30-31页 |
| ·壮苗培养 | 第31页 |
| ·芽分化培养 | 第31页 |
| ·根的诱导 | 第31页 |
| ·白三叶草遗传转化体系的建立 | 第31-33页 |
| ·选择培养基中选择压的确定 | 第31-32页 |
| ·Cef 浓度对芽分化的影响 | 第32页 |
| ·农杆菌介导转化 | 第32-33页 |
| ·转化条件的优化 | 第33页 |
| ·转化植株的分子检测 | 第33-38页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的转化 | 第34页 |
| ·碱法少量提取质粒DNA | 第34-35页 |
| ·提取农杆菌双元载体质粒 | 第35页 |
| ·植物基因组DNA 的提取 | 第35-36页 |
| ·PCR 检测及电泳分析 | 第36-37页 |
| ·PCR 反应体系 | 第36-37页 |
| ·PCR 反应程序 | 第37页 |
| ·电泳 | 第37页 |
| ·PCR-Southern 检测 | 第37-38页 |
| ·转化植株的耐盐性鉴定 | 第38页 |
| ·转化植株的抗旱性鉴定 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-58页 |
| ·白三叶草再生体系的建立 | 第39-47页 |
| ·白三叶草无菌苗的获得 | 第39-40页 |
| ·壮苗培养基的筛选 | 第40-42页 |
| ·激素的影响 | 第40页 |
| ·其他理化因素的影响 | 第40-42页 |
| ·组培苗的芽再生 | 第42-46页 |
| ·再生芽的获得 | 第42-43页 |
| ·不同激素浓度对芽分化的影响 | 第43-44页 |
| ·光照对芽分化的影响 | 第44-45页 |
| ·琼脂浓度对芽分化的影响 | 第45页 |
| ·培养容器对芽分化的影响 | 第45-46页 |
| ·外植体密度对芽分化的影响 | 第46页 |
| ·白三叶草根的诱导 | 第46-47页 |
| ·生根培养基的筛选 | 第46页 |
| ·琼脂浓度对生根的影响 | 第46-47页 |
| ·白三叶草遗传转化体系的建立 | 第47-53页 |
| ·选择压的确定 | 第47-48页 |
| ·抑菌性抗生素的选择 | 第48-49页 |
| ·预培养对转化的影响 | 第49-50页 |
| ·农杆菌菌液浓度对转化的影响 | 第50页 |
| ·侵染时间对转化的影响 | 第50-51页 |
| ·共培养对转化的影响 | 第51-52页 |
| ·恢复培养对转化的影响 | 第52-53页 |
| ·转化植株的获得 | 第53页 |
| ·转基因植株的生物学鉴定 | 第53-58页 |
| ·PCR 扩增检测 | 第53-54页 |
| ·PCR-Southern 杂交检测 | 第54-55页 |
| ·转反义PLDγ基因植株的耐盐性测定与筛选 | 第55-56页 |
| ·耐盐性植株的抗旱性测定 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| ·白三叶草的遗传转化体系的建立 | 第58-59页 |
| ·农杆菌介导转化方法的优化 | 第59-60页 |
| ·生物基因表达的反义调控 | 第60-61页 |
| ·预期结果的实现需要大田试验 | 第61页 |
| ·下一步工作设想 | 第61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间形成的学术论文 | 第76页 |
