| 中文摘要 | 第1页 |
| 关键词： | 第8-9页 |
| 第一部分 文献综述与实验设计 | 第9-24页 |
| 第一章 蛋白酶抑制剂研究进展 | 第10-22页 |
| 1.蛋白酶抑制剂的种类及其分布 | 第10-11页 |
| 2.蛋白酶抑制剂的作用 | 第11-14页 |
| ·防御作用 | 第11-12页 |
| ·调节内在的蛋白酶的平衡 | 第12页 |
| ·蛋白酶抑制剂作用机制 | 第12-14页 |
| 3.蛋白酶抑制剂的应用 | 第14-17页 |
| ·基础研究方面 | 第14-15页 |
| ·蛋白酶抑制剂与农业 | 第15页 |
| ·蛋白酶抑制剂与医学 | 第15-17页 |
| ·蛋白酶抑制剂与HIV | 第15-16页 |
| ·蛋白酶抑制剂与肿瘤 | 第16-17页 |
| ·其他方面的应用 | 第17页 |
| 4.家蚕蛋白酶抑制剂 | 第17-20页 |
| ·家蚕体液中蛋白酶抑制剂的种类 | 第17-19页 |
| ·家蚕胰凝乳蛋白酶抑制剂SCI-SB概述 | 第19-20页 |
| ·SCI-SB的发现 | 第19页 |
| ·SCI-SB多肽 | 第19-20页 |
| 5.研究展望 | 第20-22页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第22-24页 |
| 1.实验目的和意义 | 第22页 |
| 2.研究内容 | 第22-23页 |
| 3.实验流程图 | 第23-24页 |
| 第二部分 研究论文 | 第24-56页 |
| 第一章 重组表达载体的构建 | 第25-37页 |
| 1.材料和试剂 | 第25页 |
| 2.实验方法 | 第25-32页 |
| ·家蚕总RNA提取及cDNA合成 | 第25-28页 |
| ·低熔点胶回收、纯化PCR产物 | 第28页 |
| ·PCR产物双酶切 | 第28-29页 |
| ·限制性内切酶热失活 | 第29页 |
| ·载体pGEX4T-1双酶切 | 第29页 |
| ·连接反应 | 第29页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第29-32页 |
| 3.结果 | 第32-36页 |
| ·家蚕总RNA琼脂糖电泳检测 | 第32页 |
| ·RT-PCR扩增家蚕SCI-SB cDNA | 第32-33页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第33-36页 |
| ·表达载体pGEX4T-1的图谱 | 第33-34页 |
| ·重组表达载体pGEX4T-1-SCI-SB的构建策略 | 第34页 |
| ·重组表达载体pGEX4T-1-SCI-SB的鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组表达载体pGEX4T-1-SCI-SB测序结果 | 第35-36页 |
| 4.讨论 | 第36-37页 |
| 第二章 pGEX4T-1-SCI-SB在大肠杆菌中的诱导表达 | 第37-42页 |
| 1.试剂和材料 | 第37-38页 |
| 2.实验方法 | 第38-40页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第38-39页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第39页 |
| ·融合蛋白表达量的确定 | 第39页 |
| ·工程菌株BL21-pGEX4T-1-SCI-SB的保存 | 第39-40页 |
| 3.结果 | 第40-41页 |
| ·BL21-pGEX4T-I-SCI-SB不同时间的诱导表达 | 第40页 |
| ·BL21-pGEX4T-1-SCI-SB表达形式的确定 | 第40-41页 |
| 4.讨论 | 第41-42页 |
| 第三章 重组蛋白纯化和活性测定 | 第42-50页 |
| 1.材料与试剂 | 第42-43页 |
| 2.实验方法 | 第43-45页 |
| ·包涵体的复性 | 第43页 |
| ·GST亲和柱层析 | 第43-44页 |
| ·质谱鉴定分析 | 第44页 |
| ·测定融合蛋白蛋白酶抑制剂活力 | 第44-45页 |
| 3.结果 | 第45-49页 |
| ·表达产物的亲和纯化及检测 | 第45页 |
| ·融合蛋白蛋白酶抑制剂的活性测定 | 第45-46页 |
| ·质谱鉴定分析 | 第46-49页 |
| 4.讨论 | 第49-50页 |
| 第四章 抗体制备及效价测定 | 第50-56页 |
| 1.材料与试剂 | 第50-51页 |
| 2.实验方法 | 第51-54页 |
| ·抗体制备 | 第51-52页 |
| ·抗原制备 | 第51页 |
| ·免疫动物 | 第51-52页 |
| ·抗体血清制备 | 第52页 |
| ·抗体的效价测定(ELISA) | 第52-53页 |
| ·融合蛋白的Western blotting鉴定 | 第53-54页 |
| 3.结果 | 第54-55页 |
| ·抗体的效价测定 | 第54页 |
| ·Western blotting检测实验 | 第54-55页 |
| 4.讨论 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| ABSTRACT | 第62-63页 |
| 附:硕士期间发表的文章 | 第63页 |
