| 缩略词表 | 第1-8页 |
| 第一部分 新基因人N-RAP cDNA的克隆与功能分析 | 第8-54页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 一、 新基因人N-RAP cDNA的克隆 | 第14-27页 |
| (一) 材料 | 第14-16页 |
| 1 质粒与菌株 | 第14页 |
| 2 引物序列 | 第14页 |
| 3 工具酶及DNA分子量标准 | 第14-15页 |
| 4 试剂盒 | 第15页 |
| 5 主要试剂 | 第15页 |
| 6 主要仪器 | 第15-16页 |
| 7 常用溶液 | 第16页 |
| (1) LB液体及半固体培养基 | 第16页 |
| (2) 10×TAE电泳缓冲液 | 第16页 |
| (3) 6×电泳上样缓冲液 | 第16页 |
| (4) IPTG | 第16页 |
| 8 互联网资源 | 第16页 |
| (二) 方法 | 第16-19页 |
| 1 引物设计和PCR反应 | 第16-17页 |
| 2 PCR产物的纯化 | 第17页 |
| 3 目的片段和pMD18-T载体的连接 | 第17-18页 |
| 4 感受态细菌的制备 | 第18页 |
| 5 连接产物转化 | 第18页 |
| 6 质粒小量提取 | 第18页 |
| 7 转化子鉴定 | 第18-19页 |
| 8 测序、拼接和电子延伸 | 第19页 |
| 9 巢式PCR | 第19页 |
| (三) 结果 | 第19-27页 |
| 二、 人N-RAP基因的生物信息学分析 | 第27-40页 |
| (一) 研究对象 | 第27页 |
| (二) 核酸序列分析的一般流程 | 第27-30页 |
| 1 载体序列的切除 | 第27页 |
| 2 序列格式转换 | 第27-28页 |
| 3 核酸序列的电子延伸 | 第28页 |
| (1) 在线延伸 | 第28页 |
| (2) 本地延伸 | 第28页 |
| 4 基因识别 | 第28-29页 |
| (1) 基于mRNA序列的基因识别 | 第28-29页 |
| (2) 基于基因组序列的基因识别 | 第29页 |
| 5 核酸序列的同源性分析 | 第29页 |
| (1) 局部比较 | 第29页 |
| (2) 全局比较 | 第29页 |
| (3) 多序列比较 | 第29页 |
| 6 核酸序列的染色体定位 | 第29-30页 |
| 7 核酸序列的启动子分析 | 第30页 |
| 8 mRNA序列与基因组序列的对齐 | 第30页 |
| (三) 蛋白质序列分析的一般流程 | 第30-32页 |
| (四) 结果 | 第32-40页 |
| 1 人N-RAP基因的cDNA结构 | 第32-33页 |
| 2 人N-RAP基因的基因组结构 | 第33-35页 |
| 3 蛋白质特性预测 | 第35-36页 |
| 4 蛋白质序列相似性搜索 | 第36-39页 |
| 5 结构域分析 | 第39页 |
| 6 多序列对齐与进化树绘制 | 第39-40页 |
| 三、 人N-RAP基因的表达谱分析 | 第40-45页 |
| (一) 材料 | 第40-41页 |
| 1 实验标本 | 第40页 |
| 2 引物序列 | 第40页 |
| 3 主要试剂 | 第40-41页 |
| 4 互联网址 | 第41页 |
| (二) 方法 | 第41-43页 |
| 1 电子表达谱分析 | 第41页 |
| 2 神经干细胞、胎儿和正常成人骨骼肌组织总RNA的提取 | 第41-42页 |
| 3 总RNA的鉴定 | 第42页 |
| (1) 浓度分析和纯度鉴定: | 第42页 |
| (2) 完整性鉴定: | 第42页 |
| 4 反转录反应 | 第42页 |
| 5 PCR反应 | 第42-43页 |
| (1) 巢式PCR | 第42-43页 |
| (2) 半定量PCR | 第43页 |
| (3) 内部参照 | 第43页 |
| (三) 结果 | 第43-45页 |
| 四、 人N-RAP基因表达的亚细胞定位 | 第45-50页 |
| (一) 材料 | 第45页 |
| (二) 方法 | 第45-46页 |
| 1 pCMV-myc／N-RAP融合表达载体的构建 | 第45页 |
| 2 细胞培养与基因转染 | 第45-46页 |
| 3 免疫荧光实验 | 第46页 |
| (三) 结果 | 第46-50页 |
| 讨论 | 第50-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-54页 |
| 第二部分 新基因人MOB cDNA的克隆与功能分析 | 第54-88页 |
| 摘要 | 第54-55页 |
| ABSTRACT | 第55-57页 |
| 前言 | 第57-58页 |
| 一、 人MOB cDNA的克隆 | 第58-64页 |
| (一) 材料 | 第58页 |
| (二) 方法 | 第58-59页 |
| (三) 结果 | 第59-64页 |
| 二、 MOB基因的生物信息学分析 | 第64-70页 |
| (一) 研究对象 | 第64页 |
| (二) 核酸和蛋白质序列分析的方法 | 第64页 |
| (三) 结果 | 第64-70页 |
| 三、 人MOB基因的表达谱分析 | 第70-73页 |
| (一) 材料 | 第70页 |
| (二) 方法 | 第70-71页 |
| 1 电子表达谱分析 | 第70页 |
| 2 RT-PCR | 第70-71页 |
| (三) 结果 | 第71-73页 |
| 四、 人MOB基因表达的亚细胞定位 | 第73-76页 |
| (一) 材料 | 第73页 |
| (二) 方法 | 第73-74页 |
| 1 pLEGFP-C1／MOB和pEGFP-N1／MOB融合表达载体的构建 | 第73-74页 |
| 2 细胞培养与基因转染 | 第74页 |
| (三) 结果 | 第74-76页 |
| 五、 人MOB租互作用分子的筛选 | 第76-80页 |
| (一) 材料 | 第76页 |
| (二) 方法 | 第76-77页 |
| (三) 结果 | 第77-80页 |
| 六、 人MOB基因过表达不改变细胞周期 | 第80-84页 |
| (一) 材料 | 第80页 |
| (二) 方法 | 第80-81页 |
| 1 细胞培养和基因转染 | 第80页 |
| 2 半定量RT-PCR | 第80页 |
| 3 DNA含量的测定 | 第80-81页 |
| (三) 结果 | 第81-84页 |
| 讨论 | 第84-86页 |
| 结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 博士期间撰写的论著及专利 | 第89页 |
| 文献综述 | 第89-92页 |
| 内皮祖细胞研究进展 | 第89-92页 |
