缩略词 | 第1-7页 |
中文摘要 | 第7-10页 |
英文摘要 | 第10-13页 |
前言 | 第13-16页 |
第一部分 恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶基因重组表达质粒的构建及鉴定 | 第16-33页 |
材料和方法 | 第16-21页 |
一、 材料 | 第16-17页 |
二、 实验方法 | 第17-21页 |
(一) 引物设计 | 第17页 |
(二) 恶性疟原虫基因组DNA的提取 | 第17-18页 |
(三) PCR扩增 | 第18页 |
(四) GDHpf基因的克隆 | 第18-20页 |
1. 质粒DNA的制备及酶切 | 第18-19页 |
2. GDHpf目的基因的纯化、酶切 | 第19页 |
3. 质粒大片段及目的基因片断的分离和回收 | 第19页 |
4. 目的基因片断与载体的连接反应 | 第19页 |
5. 感受态细胞的制备 | 第19页 |
6. 转化 | 第19-20页 |
(五) 重组克隆的筛选及鉴定 | 第20页 |
1. 初步鉴定 | 第20页 |
2. PCR鉴定 | 第20页 |
3. 酶切鉴定 | 第20页 |
(六) GDHpf基因序列测定及同源性分析 | 第20-21页 |
结果 | 第21-30页 |
一、 GDH基因的扩增 | 第21页 |
二、 重组克隆的筛选及鉴定 | 第21-23页 |
三、 序列测定及同源性分析 | 第23-30页 |
讨论 | 第30-32页 |
小结 | 第32-33页 |
第二部分 重组蛋白的表达、纯化及抗原活性研究 | 第33-49页 |
材料和方法 | 第33-37页 |
一、 材料 | 第33-35页 |
二、 实验方法 | 第35-37页 |
(一) GDH基因的诱导表达 | 第35页 |
(二) 表达产物SDS-PAGE分析 | 第35页 |
(三) 表达产物的纯化 | 第35-36页 |
(四) 表达产物抗原性分析 | 第36-37页 |
1. ELISA | 第36页 |
2. Western-blot | 第36页 |
3. 免疫血清的制备 | 第36页 |
4. 免疫血清的特异性鉴定 | 第36-37页 |
结果 | 第37-45页 |
一、 重组质粒的表达 | 第37-40页 |
(一) 诱导时相的优化 | 第37-38页 |
(二) 诱导时间的优化 | 第38页 |
(三) 诱导剂浓度的优化 | 第38-40页 |
二、 表达蛋白的纯化 | 第40-42页 |
三、 表达产物免疫学鉴定 | 第42页 |
四、 多抗制备及特异性鉴定 | 第42-45页 |
讨论 | 第45-48页 |
小结 | 第48-49页 |
总结 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-55页 |
致谢 | 第55-56页 |
综述 | 第56-68页 |
附录一: 硕士期间论文发表情况 | 第68-69页 |
附录二: Genbank登录情况 | 第69-70页 |