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恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶基因的克隆、表达及产物抗原活性研究

缩略词第1-7页
中文摘要第7-10页
英文摘要第10-13页
前言第13-16页
第一部分 恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶基因重组表达质粒的构建及鉴定第16-33页
 材料和方法第16-21页
  一、 材料第16-17页
  二、 实验方法第17-21页
   (一) 引物设计第17页
   (二) 恶性疟原虫基因组DNA的提取第17-18页
   (三) PCR扩增第18页
   (四) GDHpf基因的克隆第18-20页
    1. 质粒DNA的制备及酶切第18-19页
    2. GDHpf目的基因的纯化、酶切第19页
    3. 质粒大片段及目的基因片断的分离和回收第19页
    4. 目的基因片断与载体的连接反应第19页
    5. 感受态细胞的制备第19页
    6. 转化第19-20页
   (五) 重组克隆的筛选及鉴定第20页
    1. 初步鉴定第20页
    2. PCR鉴定第20页
    3. 酶切鉴定第20页
   (六) GDHpf基因序列测定及同源性分析第20-21页
 结果第21-30页
  一、 GDH基因的扩增第21页
  二、 重组克隆的筛选及鉴定第21-23页
  三、 序列测定及同源性分析第23-30页
 讨论第30-32页
 小结第32-33页
第二部分 重组蛋白的表达、纯化及抗原活性研究第33-49页
 材料和方法第33-37页
  一、 材料第33-35页
  二、 实验方法第35-37页
   (一) GDH基因的诱导表达第35页
   (二) 表达产物SDS-PAGE分析第35页
   (三) 表达产物的纯化第35-36页
   (四) 表达产物抗原性分析第36-37页
    1. ELISA第36页
    2. Western-blot第36页
    3. 免疫血清的制备第36页
    4. 免疫血清的特异性鉴定第36-37页
 结果第37-45页
  一、 重组质粒的表达第37-40页
   (一) 诱导时相的优化第37-38页
   (二) 诱导时间的优化第38页
   (三) 诱导剂浓度的优化第38-40页
  二、 表达蛋白的纯化第40-42页
  三、 表达产物免疫学鉴定第42页
  四、 多抗制备及特异性鉴定第42-45页
 讨论第45-48页
 小结第48-49页
总结第49-50页
参考文献第50-55页
致谢第55-56页
综述第56-68页
附录一: 硕士期间论文发表情况第68-69页
附录二: Genbank登录情况第69-70页

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