| 中文摘要 | 第1-15页 |
| 1． 引言 | 第15-29页 |
| 1．1 AM真菌及其在生态农业中的重要地位和发展前景 | 第15-18页 |
| 1．2 AM真菌与植物土传病原物的拮抗作用 | 第18-20页 |
| 1．2．1 AM真菌与植物病原线虫间的相互作用 | 第18-19页 |
| 1．2．1．1 AM真菌对病原线虫的影响 | 第18页 |
| 1．2．1．2 病原线虫对AM真菌的影响 | 第18-19页 |
| 1．2．2 AM真菌与植物病原真菌间的相互作用 | 第19-20页 |
| 1．3 AM真菌提高植物抗病性的可能机制 | 第20-26页 |
| 1．3．1 改善植物营养、水分和内源激素状况 | 第20页 |
| 1．3．2 与病原物竞争寄主光合产物和侵染位点 | 第20-21页 |
| 1．3．3 诱导根系形态和解剖结构发生变化 | 第21页 |
| 1．3．4 改变菌根围内微生物区系的组成 | 第21页 |
| 1．3．5 激活寄主防御机制 | 第21-26页 |
| 1．3．5．1 植物细胞壁的变化 | 第21-23页 |
| 1．3．5．2 植物病程相关蛋白的积累 | 第23-25页 |
| 1．3．5．3 植物次生代谢的加强 | 第25-26页 |
| 1．4 植物的诱导抗病性及信号传导 | 第26-27页 |
| 1．5 本研究的目的与意义 | 第27-29页 |
| 2． 材料与方法 | 第29-42页 |
| 2．1 试验材料 | 第29-30页 |
| 2．1．1 AM真菌 | 第29页 |
| 2．1．2 线虫 | 第29页 |
| 2．1．3 植物材料 | 第29页 |
| 2．1．4 菌株及质粒 | 第29页 |
| 2．1．5 酶及生化试剂 | 第29页 |
| 2．1．6 PCR引物 | 第29-30页 |
| 2．2 试验设计 | 第30-31页 |
| 2．3 试验方法 | 第31-42页 |
| 2．3．1 AM真菌及线虫侵染率的测定 | 第31页 |
| 2．3．2 酶活性及蛋白质浓度的测定 | 第31-32页 |
| 2．3．2．1 POD活性测定 | 第31页 |
| 2．3．2．2 PAL活性测定 | 第31页 |
| 2．3．2．3 β-1，3葡聚糖酶活性测定 | 第31页 |
| 2．3．2．4 几丁质酶活性测定 | 第31-32页 |
| 2．3．2．5 提取液中蛋白质浓度的测定 | 第32页 |
| 2．3．3 水杨酸（SA）含量测定 | 第32页 |
| 2．3．4 RNA的提取、转膜及Northern杂交 | 第32-34页 |
| 2．3．4．1 RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2．3．4．2 转膜 | 第33页 |
| 2．3．4．3 Northern杂交 | 第33-34页 |
| 2．3．5 相对定量反转录PCR（RQRT-PCR）、转膜及Southern杂交 | 第34-35页 |
| 2．3．5．1 相对定量反转录PCR（RQRT-PCR） | 第34页 |
| 2．3．5．2 转膜 | 第34-35页 |
| 2．3．5．3 Southern杂交 | 第35页 |
| 2．3．6 DNA的提取及山葡萄几丁质酶基因VCH3启动子的分离 | 第35-36页 |
| 2．3．6．1 DNA的提取（CTAB法） | 第35-36页 |
| 2．3．6．2 山葡萄几丁质酶基因VCH3启动子的分离 | 第36页 |
| 2．3．7 VCH3启动子转录起始位点的鉴定 | 第36-38页 |
| 2．3．7．1 引物延伸反应 | 第36-37页 |
| 2．3．7．2 利用末端标记引物进行的序列测定反应 | 第37-38页 |
| 2．3．8 山葡萄几丁质酶基因VCH3启动子的片段缺失、表达载体的构建、转化农杆菌及农杆菌介导转化烟草 | 第38-40页 |
| 2．3．8．1 VCH3启动子的片段缺失 | 第38页 |
| 2．3．8．2 VCH3启动子各缺失片段：：GUS融合基因表达载体的构建 | 第38页 |
| 2．3．8．3 冻融法转化农杆菌 | 第38-40页 |
| 2．3．8．4 农杆菌介导转化烟草 | 第40页 |
| 2．3．9 转基因烟草接种AM真菌及水杨酸（SA）处理 | 第40页 |
| 2．3．10 GUS活性测定及组织化学分析 | 第40-42页 |
| 2．3．10．1 GUS活性的荧光测定 | 第40-41页 |
| 2．3．10．2 GUS活性的组织化学分析 | 第41-42页 |
| 3． 结果与分析 | 第42-83页 |
| 3．1 AM真菌诱导植物抗/耐线虫病害的生化机制 | 第42-52页 |
| 3．1．1 AM真菌侵染率及植物病原线虫侵染速率的变化 | 第42-45页 |
| 3．1．2 接种AM真菌和植物病原线虫后植物根中几种酶活性的变化 | 第45-52页 |
| 3．1．2．1 过氧化物酶活性（POD）的变化 | 第45-47页 |
| 3．1．2．2 苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性的变化 | 第47-48页 |
| 3．1．2．3 几丁质酶活性的变化 | 第48-50页 |
| 3．1．2．4 β-1，3葡聚糖酶的变化 | 第50-52页 |
| 3．2 AM真菌诱导植物扣耐线虫病害的分子机制 | 第52-66页 |
| 3．2．1 接种AM真菌和线虫后大豆根中苯丙氨酸解氨酶（PAL）mRNA的表达分析 | 第52-56页 |
| 3．2．1．1 扁豆和芸豆叶片苯丙氨酸解氨酶基因PAL5基因组片段的分离 | 第52-54页 |
| 3．2．1．2 接种AM真菌和大豆胞囊线虫后PAL5基因mRNA的动态变化 | 第54-56页 |
| 3．2．2 接种AM真菌和植物病原线虫后植物根中几丁质酶基因mRNA的表达分析 | 第56-64页 |
| 3．2．2．1 大豆几丁质酶基因Chibl cDNA的分离 | 第56页 |
| 3．2．2．2 接种AM真菌和大豆胞囊线虫后大豆根中几丁质酶Chibl mRNA的动态变化 | 第56-60页 |
| 3．2．2．3 山葡萄几丁质酶基因VCH3 cDNA的分离 | 第60页 |
| 3．2．2．4 接种AM真菌和南方根结线虫后山葡萄根中几丁质酶VCH3 mRNA的动态变化 | 第60-64页 |
| 3．2．3 接种AM真菌和南方根结线虫后山葡萄根中水杨酸（SA）含量的动态变化 | 第64-66页 |
| 3．3 AM真菌诱导植物抗/耐线虫病害机制中的信号传导 | 第66-83页 |
| 3．3．1 山葡萄几丁质酶基因VCH3启动子的分离 | 第66-68页 |
| 3．3．2 VCH3启动子转录起始位点的鉴定 | 第68-69页 |
| 3．3．3 VCH3启动子的序列特征 | 第69-71页 |
| 3．3．4 VCH3启动子缺失片段的产生、表达载体的构建及烟草转化 | 第71-74页 |
| 3．3．5 部分转基因烟草的PCR检测 | 第74-77页 |
| 3．3．6 转基因烟草接种AM真菌及水杨酸（SA）处理后各缺失启动子片段驱动GUS酶活性的表达分析 | 第77-79页 |
| 3．3．7 转基因烟草接种AM真菌及水杨酸处理后缺失启动子片段驱动GUS酶活性的组织化学分析 | 第79-83页 |
| 4． 讨论 | 第83-93页 |
| 4．1 POD、PAL、几丁质酶及β-1，3葡聚糖酶在AM真菌诱导植物抗／耐线虫病害生化机制中的作用 | 第83-86页 |
| 4．1．1 POD的作用 | 第83页 |
| 4．1．2 PAL的作用 | 第83-84页 |
| 4．1．3 几丁质酶及β-1，3葡聚糖酶的作用 | 第84-86页 |
| 4．2 AM真菌在转录水平上诱导防卫基因表达的抗／耐线虫病害的分子机制 | 第86-89页 |
| 4．2．1 相对定量RT-PCR（RQRT-PCR）在丛枝菌根基因表达研究中的应用 | 第86-87页 |
| 4．2．2 AM真菌诱导防卫基因表达的抗／耐线虫病害分子机制 | 第87-89页 |
| 4．3 AM真菌诱导植物抗／耐线虫病害的ISR信号传导途径中的信号物质 | 第89-93页 |
| 4．3．1 植物的诱导抗病性及SA在信号传导中的作用 | 第89-90页 |
| 4．3．2 SA在AM真菌诱导植物抗／耐线虫病害的ISR信号传导途径中的信号物质作用 | 第90-93页 |
| 5． 结论 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-109页 |
| 英文摘要 | 第109-112页 |
| 附录1 大肠杆菌感受态细胞的制备与热激法转化 | 第112-113页 |
| 附录2 根癌农杆菌感受态细胞的制备与冻融法转化 | 第113-114页 |
| 附录3 质粒DNA的微量及大量提取 | 第114-116页 |
| 附录4 反转录、质粒DAN酶切及PCR反应体系 | 第116-117页 |
| 附录5 GUS活性的荧光检测 | 第117-119页 |
| 附录6 常用缓冲液及培养基的配制 | 第119-123页 |
| 附录7 博士期间形成的主要学术论文 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
