| 第一章 前言 | 第1-15页 |
| 1．1 超高温菌和热稳定性酶 | 第8-10页 |
| 1．2 大肠杆菌高密度培养的方法 | 第10-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-25页 |
| 2．1 实验材料 | 第15-16页 |
| 2．1．1 供体菌、宿主菌、基因及载体 | 第15-16页 |
| 2．1．2 实验试剂 | 第16页 |
| 2．1．3 主要实验设备 | 第16页 |
| 2．2 实验方法 | 第16-25页 |
| 2．2．1 基因工程大肠杆菌培养方法 | 第16-21页 |
| 2．2．1．1 表达质粒的大量制备与纯化 | 第16-17页 |
| 2．2．1．2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第17-18页 |
| 2．2．1．3 表达质粒对大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第18页 |
| 2．2．1．4 发酵用菌种的制备 | 第18页 |
| 2．2．1．5 基因工程大肠杆菌摇瓶培养法 | 第18页 |
| 2．2．1．6 基因工程大肠杆菌的分批培养 | 第18-19页 |
| 2．2．1．7 基因工程大肠杆菌的pH-Stat分批补料培养 | 第19页 |
| 2．2．1．8 在BL21-Codon Plus中进行的pH-Stat分批补料培养 | 第19-20页 |
| 2．2．1．9 乳糖诱导的pH-Stat分批补料培养 | 第20页 |
| 2．2．1．10 粗酶的提取方法 | 第20-21页 |
| 2．2．2 分析方法 | 第21-25页 |
| 2．2．2．1 细胞密度OD_（600）及细胞干重测定方法和比生长速率计算方法 | 第21页 |
| 2．2．2．2 葡萄糖浓度测定方法 | 第21-22页 |
| 2．2．2．3 乙酸测定方法 | 第22-23页 |
| 2．2．2．4 高温淀粉酶活力测定方法 | 第23页 |
| 2．2．2．5 质粒稳定性测定方法 | 第23-24页 |
| 2．2．2．6 聚丙烯酰胺凝胶电泳方法 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与分析 | 第25-33页 |
| 3．1 三种葡萄糖测定方法在本实验中的比较 | 第25-26页 |
| 3．2 基因工程大肠杆菌的摇瓶培养 | 第26页 |
| 3．3 基因工程大肠杆菌的分批培养 | 第26-27页 |
| 3．4 基因工程大肠杆菌的pH-Stat分批补料培养 | 第27-31页 |
| 3．4．1 pH-Stat分批补料培养条件的选择 | 第27-28页 |
| 3．4．2 IPTG诱导的基因工程大肠杆菌高密度培养 | 第28-30页 |
| 3．4．2．1 在BL21（DE3）PlysS中进行的高密度培养 | 第28-29页 |
| 3．4．2．2 在宿主菌BL21-Codon Plus（DE3）-RIL中进行的高密度培养 | 第29-30页 |
| 3．4．3 乳糖诱导的基因工程大肠杆菌高密度培养 | 第30-31页 |
| 3．5 基因工程大肠杆菌高密度培养过程中的质粒稳定性 | 第31页 |
| 3．6 聚丙烯酰胺凝胶电泳及基因表达率 | 第31-33页 |
| 第四章 讨论 | 第33-38页 |
| 4．1 葡萄糖测定方法在大肠杆菌高密度培养中的应用 | 第33-34页 |
| 4．2 pH-Stat法获得高密度培养的探讨 | 第34-35页 |
| 4．3 影响表达水平的若干因素 | 第35-37页 |
| 4．3．1 高密度培养过程中质粒的稳定性 | 第35-36页 |
| 4．3．2 稀有密码子对超高温菌基因在大肠杆菌中表达的影响 | 第36-37页 |
| 4．3．3 乳糖作为诱导剂对基因表达的影响 | 第37页 |
| 4．4 问题与展望 | 第37-38页 |
| 第五章 结论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-42页 |
| 附录 | 第42-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
