| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 一.前言 | 第10-18页 |
| 二.材料与方法 | 第18-48页 |
| (一) 材料 | 第18-19页 |
| 1.菌株与质粒 | 第18页 |
| 2.实验用小鼠 | 第18页 |
| 3.限制性内切酶及修饰酶 | 第18页 |
| 4.其它主要试剂 | 第18页 |
| 5.放射性核素 | 第18-19页 |
| 6.主要仪器设备 | 第19页 |
| (二) 实验方法 | 第19-48页 |
| 1.显微注射法制备转基因小鼠实验程序 | 第19-22页 |
| 2.基因克隆 | 第22-28页 |
| ·两种携带突变HS2酵母穿梭质粒的设计 | 第22页 |
| ·低融点琼脂糖凝胶回收DNA片段 | 第22-24页 |
| ·DNA片段3’凹端的补平 | 第24页 |
| ·克隆载体的脱磷酸化 | 第24页 |
| ·连接反应 | 第24-25页 |
| ·感受态大肠杆菌细胞制备 | 第25页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第25页 |
| ·克隆筛选 | 第25-27页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第27页 |
| ·质粒DNA的纯化 | 第27-28页 |
| ·荧光测序 | 第28页 |
| 3.酵母人工染色体(YAC)定位突变 | 第28-30页 |
| ·含YAC之酵母菌的培养 | 第28-29页 |
| ·感受态酵母细胞的制备 | 第29页 |
| ·酵母细胞的电穿孔转化及正-筛选(URA) | 第29-30页 |
| ·反筛选(5-FOA)确定突变YAC克隆 | 第30页 |
| ·Southern印迹杂交鉴定YAC突变体 | 第30页 |
| 4.显微注射用DNA的制备与纯化 | 第30-32页 |
| 5.受精卵培养基的配制与保存 | 第32-34页 |
| 6.小鼠的选择与处理 | 第34页 |
| 7.超排卵和取卯 | 第34-36页 |
| 8.显微注射 | 第36-37页 |
| 9.输卵管移卵 | 第37-40页 |
| 10.胚胎小鼠器官组织的采集和保存 | 第40页 |
| 11.鼠尾基因组DNA的提取 | 第40-41页 |
| 12.Southern印迹杂交鉴定转基因鼠 | 第41-42页 |
| 13.YAC DNA整合完整性检测 | 第42-43页 |
| 14.转基因鼠传代 | 第43页 |
| 15.组织RNA提取 | 第43页 |
| 16.RNase保护实验检测人β-珠蛋白转基因的表达 | 第43-47页 |
| 17.多重RT-PCR检测人γ-和ε-珠蛋白转基因的表达 | 第47-48页 |
| 三.实验结果 | 第48-67页 |
| (一) 两种PRS306／△HS2穿梭质粒的构建 | 第48-52页 |
| (二) 重组穿梭质粒在酵母细胞中的同源重组和正负筛选 | 第52-57页 |
| (三) 脉冲场凝胶电泳(PFGE)分离β-YAC DNA | 第57-60页 |
| (四) 转基因小鼠系的建立 | 第60-67页 |
| 1.正常β-YAC和两种突变β-YAC转基因小鼠系的建立 | 第60-64页 |
| 2.人β、γ、ε珠蛋白基因在转基因小鼠中的表达 | 第64-67页 |
| 四.讨论 | 第67-72页 |
| 五.小结 | 第72-73页 |
| 六.参考文献 | 第73-78页 |
| 七.综述 遗传病的转基因动物模型 | 第78-94页 |
| (一) 建立转基因动物的方式 | 第78-79页 |
| (二) 转基因动物种类 | 第79页 |
| (三) 人类遗传病的转基因动物模型 | 第79-89页 |
| (四) 展望 | 第89-91页 |
| (五) 参考文献 | 第91-94页 |
| 八.英文名词及缩写 | 第94-97页 |
| 九.致谢 | 第97页 |
