| 论文创新点 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-15页 |
| 第一章 HCV研究进展 | 第15-51页 |
| ·丙型肝炎的流行病学 | 第15-16页 |
| ·世界丙型肝炎流行状况 | 第15页 |
| ·我国丙型肝炎流行状况 | 第15-16页 |
| ·丙型肝炎传播途径 | 第16页 |
| ·HCV的感染与发病 | 第16-19页 |
| ·HCV的急性感染(acute phase of HCV infection) | 第17页 |
| ·HCV的慢性感染(persistence of HCV infection) | 第17-18页 |
| ·肝组织纤维化及肝硬化(Hepatic Fibrosis and Cirrhosis)阶段 | 第18页 |
| ·肝衰竭(Liver Failure)阶段 | 第18页 |
| ·肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma;HCC)阶段 | 第18-19页 |
| ·HCV的分子生物学 | 第19-37页 |
| ·HCV的基因组 | 第19-21页 |
| ·HCV分型 | 第21页 |
| ·HCV的生活史 | 第21-27页 |
| ·病毒—细胞相互作用 | 第27-31页 |
| ·研究HCV的模型系统 | 第31-37页 |
| ·HCV治疗研究进展 | 第37-38页 |
| ·HCV细胞入侵和相关受体研究 | 第38-48页 |
| ·HCV的细胞受体 | 第38-45页 |
| ·HCV的入胞途径 | 第45-48页 |
| ·HCV疫苗研究进展 | 第48-51页 |
| 第二章 毕赤酵母表达系统 | 第51-62页 |
| ·毕赤酵母(PICHIA PASTORIS)的生物学特性 | 第52-53页 |
| ·载体类型 | 第53-54页 |
| ·线性化DNA整合入毕赤酵母基因组的方式 | 第54-55页 |
| ·多拷贝重组酵母转化子的筛选 | 第55页 |
| ·毕赤酵母对外源蛋白的分泌型表达及翻译后修饰 | 第55-56页 |
| ·外源蛋白的诱导表达 | 第56-57页 |
| ·毕赤酵母在外源蛋白生产中的应用 | 第57-58页 |
| ·提高外源蛋白在巴斯德毕赤酵母中表达量的途径 | 第58-62页 |
| ·优化基因内部结构 | 第58页 |
| ·改造分泌信号 | 第58-59页 |
| ·选择高表达的启动子 | 第59页 |
| ·筛选高拷贝转化子 | 第59页 |
| ·调整甲醇浓度和诱导时间 | 第59-60页 |
| ·选择合适的培养温度 | 第60页 |
| ·阻止外源蛋白降解 | 第60-61页 |
| ·选择合适的酵母菌生长密度 | 第61-62页 |
| 第三章 HCV重组E1E2糖蛋白在毕赤酵母中的表达和纯化 | 第62-86页 |
| ·实验材料 | 第62-68页 |
| ·实验方法 | 第68-78页 |
| ·重组表达质粒pPIC9K-E1E2的构建 | 第68-73页 |
| ·电转化pPIC9K-E1E2进入毕赤酵母SMD1168菌株 | 第73-74页 |
| ·甲醇快利用型高拷贝表达菌株的筛选 | 第74-76页 |
| ·甲醇诱导的重组E1E2糖蛋白的表达 | 第76页 |
| ·重组E1E2糖蛋白的纯化和检测 | 第76-78页 |
| ·实验结果 | 第78-83页 |
| ·重组表达质粒pPIC9K-E1E2的构建和鉴定 | 第78-79页 |
| ·SMD1168 pPIC9K-E1E2转化菌株的鉴定 | 第79-80页 |
| ·HCV重组E1E2糖蛋白在毕赤酵母SMD1168转化菌株中的诱导表达、纯化及鉴定 | 第80-83页 |
| ·讨论 | 第83-86页 |
| 第四章 HCV重组E1E2糖蛋白的生物学性质研究 | 第86-99页 |
| ·实验材料 | 第86-87页 |
| ·实验方法 | 第87-92页 |
| ·糖苷酶切实验 | 第87-88页 |
| ·GST-pulldown实验 | 第88-91页 |
| ·HCV病毒样粒子的形成和富集 | 第91-92页 |
| ·实验结果 | 第92-96页 |
| ·重组E1E2糖蛋白含有复杂的糖基化形式 | 第92-93页 |
| ·重组E1E2糖蛋白同人CD81的相互作用 | 第93-95页 |
| ·重组E1E2糖蛋白同HCV core蛋白在体外形成病毒样粒子 | 第95-96页 |
| ·讨论 | 第96-99页 |
| 第五章 HCV重组E1E2糖蛋白的免疫学性质研究 | 第99-118页 |
| ·实验材料 | 第99-100页 |
| ·实验方法 | 第100-111页 |
| ·HCV重组E1E2糖蛋白免疫实验动物的研究 | 第100-101页 |
| ·GST-pulldown抑制实验 | 第101页 |
| ·HCV假病毒粒子的产生、富集和感染 | 第101-110页 |
| ·兔免疫血清抑制HCV假病毒粒子的感染 | 第110页 |
| ·HCVcc抑制实验 | 第110-111页 |
| ·实验结果 | 第111-115页 |
| ·HCV重组E1E2糖蛋白诱导实验动物产生抗E1E2抗体 | 第111-112页 |
| ·兔免疫血清抑制重组E1E2糖蛋白与CD81之间的相互作用 | 第112页 |
| ·兔免疫血清同时抑制两种亚型的HCV假病毒粒子的感染 | 第112-114页 |
| ·兔免疫血清可以抑制HCVcc系统产生的HCV病毒粒子的感染 | 第114-115页 |
| ·讨论 | 第115-118页 |
| 参考文献 | 第118-145页 |
| 在读期间发表论文 | 第145-147页 |
| 后记 | 第147-148页 |
