| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-16页 |
| ·淇河鲫研究概况 | 第10页 |
| ·鱼类生长激素(GH)研究概况 | 第10-13页 |
| ·鱼类生长激素（GH）的研究水平 | 第11-12页 |
| ·鱼类生长激素对鱼类生长作用机制研究 | 第12页 |
| ·重组鱼类生长激素及其应用的研究 | 第12-13页 |
| ·毕赤巴斯德酵母表达系统 | 第13-16页 |
| ·毕赤巴斯德酵母表达系统的优点 | 第14页 |
| ·毕赤巴斯德酵母生物学特点 | 第14-16页 |
| 2 引言 | 第16-17页 |
| 3 材料与方法 | 第17-33页 |
| ·淇河鲫生长激素 cDNA 的克隆与序列分析的材料和方法 | 第17-24页 |
| ·试验材料材料与方法 | 第17-18页 |
| ·试验所用到的仪器 | 第17页 |
| ·试验所用到的药品和试剂 | 第17页 |
| ·溶液及其配制方法 | 第17页 |
| ·培养基及其配制方法 | 第17-18页 |
| ·试验动物 | 第18页 |
| ·试验方法 | 第18-24页 |
| ·引物的设计和合成 | 第18页 |
| ·淇河鲫垂体总 RNA 的提取和检测 | 第18-19页 |
| ·淇河鲫脑垂体总 RNA 的反转录 | 第19页 |
| ·淇河鲫 GH cDNA 部分片段的扩增 | 第19页 |
| ·淇河鲫 GH cDNA 3’端（下游区）片段的扩增 | 第19-21页 |
| ·淇河鲫 GH cDNA 5’端（上游区）片段的扩增 | 第21-22页 |
| ·目的片段的回收纯化 | 第22页 |
| ·回收后 PCR 产物的连接转化 | 第22页 |
| ·重组质粒的筛选、克隆及保菌 | 第22-23页 |
| ·重组质粒的提取 | 第23页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第23页 |
| ·重组质粒DNA序列测定、分析、比较及系统进化树的构建 | 第23-24页 |
| ·PPIC9k--GH 的构建、克隆及在毕赤酵母 GS115 中的分泌表达的材料和方法 | 第24-33页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·生长GH 基因 | 第24页 |
| ·菌株、质粒与工具酶 | 第24页 |
| ·化学试剂及试剂盒 | 第24页 |
| ·储液和培养基 | 第24-26页 |
| ·储液 | 第24-25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| ·试验动物 | 第26页 |
| ·试验方法 | 第26-31页 |
| ·引物的设计和合成 | 第26页 |
| ·PCR 扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第27页 |
| ·双酶切 PCR 产物及表达载体 PPIC9k | 第27页 |
| ·DNA 快速回收试剂盒回收酶切产物 | 第27页 |
| ·目的基因与表达质粒的连接转化 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的筛选、克隆及保菌 | 第28页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的DNA 序列测定 | 第29页 |
| ·大量提取重组表达质粒PIC9k-GH | 第29页 |
| ·电转化DNA 样品的制备 | 第29页 |
| ·巴斯德毕赤酵母菌株GS115 感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·巴斯德毕赤酵母感受态细胞的电转化 | 第29-30页 |
| ·阳性转化子的抗性筛选 | 第30页 |
| ·转化子的PCR鉴定 | 第30页 |
| ·用于PCR 鉴定的酵母基因组的抽提 | 第30页 |
| ·酵母转化子的基因组的PCR鉴定 | 第30-31页 |
| ·不同重组毕赤酵母菌株的诱导表达筛选 | 第31页 |
| ·上清蛋白质沉淀法 | 第31页 |
| ·发酵表达上清液的SDS-PAGE 检测 | 第31-33页 |
| ·SDS-PAGE 试剂的配制 | 第31-32页 |
| ·分离胶和浓缩胶的配置 | 第32页 |
| ·制备样品和上样 | 第32-33页 |
| ·电泳 | 第33页 |
| ·考马斯亮蓝染色 | 第33页 |
| 4 结果与分析 | 第33-42页 |
| ·淇河鲫生长激素cDNA 的克隆与序列分析的结果与分析 | 第33-39页 |
| ·淇河鲫垂体总 RNA 的提取 | 第33-34页 |
| ·淇河鲫GH cDNA 部分片段的扩增 | 第34页 |
| ·淇河鲫生长激素cDNA 3’端序列的克隆 | 第34-35页 |
| ·淇河鲫生长激素cDNA 5’端序列的克隆 | 第35-37页 |
| ·淇河鲫生长激素cDNA 碱基序列与其它动物的相似性比较 | 第37-38页 |
| ·淇河鲫生长激素氨基酸成分分析 | 第38页 |
| ·不同动物生长激素氨基酸序列的同源性比较分析 | 第38-39页 |
| ·鱼类生长激素和其它脊椎动物生长激素的进化分析 | 第39页 |
| ·PPIC9k--GH 的构建、克隆及在毕赤酵母 GS115 中的分泌表达的结果与分析 | 第39-42页 |
| ·淇河鲫 GH cDNA 部分片段的扩增 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的菌液 PCR 鉴定 | 第40页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·淇河鲫生长激素序列的测定 | 第41页 |
| ·酵母阳性转化子的 PCR 鉴定 | 第41页 |
| ·酵母转化子的基因组的 PCR 鉴定 | 第41-42页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE | 第42页 |
| 5 讨论 | 第42-49页 |
| ·鱼生长激素应用现状及展望 | 第42-43页 |
| ·表达载体的选择与构建 | 第43页 |
| ·外源基因在酵母中的整合方式 | 第43-44页 |
| ·电击转化条件对酵母转化的影响 | 第44页 |
| ·用PCR 方法对酵母转化子进行鉴定 | 第44页 |
| ·影响表达量的因素 | 第44-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 英文摘要 | 第54-55页 |
