| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-30页 |
| 1 病原及流行病学 | 第14-18页 |
| ·病原 | 第14页 |
| ·流行病学 | 第14-18页 |
| ·发达国家的流行状况 | 第14-16页 |
| ·发展中国家的流行状况 | 第16-17页 |
| ·我国的流行状况 | 第17-18页 |
| 2 分支杆菌的基因分型研究 | 第18-19页 |
| 3 致病机理研究 | 第19-23页 |
| ·分枝杆菌的化学结构 | 第19页 |
| ·结核分枝杆菌逃避巨噬细胞吞噬的机理 | 第19-21页 |
| ·受体等介导的病原体内吞作用 | 第20页 |
| ·阻止吞噬溶酶体的形成 | 第20-21页 |
| ·抵抗 R0I 和 RNI 的杀伤作用 | 第21页 |
| ·结核分枝杆菌的基因有助于持续感染 | 第21-22页 |
| ·结核分枝杆菌与细胞凋亡 | 第22-23页 |
| 4 免疫机理研究 | 第23页 |
| 5 牛结核病的诊断 | 第23-26页 |
| ·ELISA 检测法 | 第24页 |
| ·胶体金诊断法 | 第24-25页 |
| ·IFN-γ诊断法 | 第25页 |
| ·聚合酶链反应 | 第25-26页 |
| ·核酸探针检测法 | 第26页 |
| 6 防制 | 第26-27页 |
| 7 结核杆菌核酸疫苗研究进展 | 第27-29页 |
| ·核酸疫苗简介 | 第27-28页 |
| ·核酸疫苗的特点 | 第28页 |
| ·核酸疫苗研究进展 | 第28-29页 |
| 8 实验目的及意义 | 第29-30页 |
| 试验一、牛结核分枝杆菌OMP37、OMP12 基因的克隆与分析 | 第30-44页 |
| 1 材料与方法 | 第31-38页 |
| ·材料 | 第31-33页 |
| ·仪器与试剂 | 第31页 |
| ·细菌与载体 | 第31页 |
| ·培养基的配制 | 第31-32页 |
| ·改良罗氏培养基的制备 | 第31页 |
| ·LB培养基的制备 | 第31-32页 |
| ·溶液的配制 | 第32页 |
| ·PCR 引物 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-38页 |
| ·模板DNA的提取 | 第33页 |
| ·PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·PCR 产物的克隆和序列分析 | 第34-38页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第34-35页 |
| ·PCR 产物的连接 | 第35页 |
| ·大肠杆菌 BL21 感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35-36页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第36页 |
| ·质粒DNA 的PCR 鉴定 | 第36-37页 |
| ·阳性质粒的酶切鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒的序列测定及分析 | 第37-38页 |
| 2. 结果 | 第38-42页 |
| ·牛结核分枝杆菌的培养 | 第38页 |
| ·牛结核分枝杆菌 OMP37、12 基因 PCR 扩增 | 第38-39页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第39-42页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第39-41页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·序列测定结果 | 第42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 试验二 牛结核分支杆菌OMP37、OMP12基因的表达及免疫活性检测 | 第44-61页 |
| 1 材料与方法 | 第44-55页 |
| ·材料 | 第44-46页 |
| ·仪器与试剂 | 第45页 |
| ·菌株和质粒 | 第45页 |
| ·主要溶液的配制 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE 试剂 | 第45-46页 |
| ·Western-blot印迹试剂 | 第46页 |
| ·引物设计 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-55页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第46-50页 |
| ·牛结核分枝杆菌OMP37、OMP12基因的PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·PCR产物纯化回收 | 第47-48页 |
| ·载体pGEX-4T-2 的制备 | 第48页 |
| ·PCR 产物和载体pGEX-4T-2 的酶切 | 第48-49页 |
| ·载体和目的基因片段的回收纯化 | 第49页 |
| ·载体与目的基因片段的连接 | 第49页 |
| ·BL21 感受态细胞的制备 | 第49-50页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第50页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第50-52页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第50-51页 |
| ·质粒DNA 的PCR 鉴定 | 第51-52页 |
| ·质粒 DNA 的酶切鉴定 | 第52页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第52页 |
| ·重组阳性克隆的原核表达 | 第52-55页 |
| ·重组阳性克隆的诱导表达 | 第52-53页 |
| ·SDS-PAGE 样品的制备 | 第53页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第53-54页 |
| ·表达蛋白的免疫原性检测 | 第54-55页 |
| 2 结果 | 第55-59页 |
| ·OMP37、OMP12 PCR 扩增结果 | 第55页 |
| ·原核表达重组质粒的构建及测序 | 第55-56页 |
| ·OMP37、OMP12 基因片段在大肠杆菌中的表达 | 第56-57页 |
| ·Western-blotting 分析 | 第57-59页 |
| 3. 讨论 | 第59-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第71页 |
