| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-26页 |
| ·谷氨酰胺的性质和生产状况 | 第9-11页 |
| ·L-谷氨酰胺的基本理化性质 | 第9-10页 |
| ·谷氨酰胺的市场状况 | 第10-11页 |
| ·L-谷氨酰胺的生产方法 | 第11-15页 |
| ·化学法 | 第11页 |
| ·发酵法 | 第11-13页 |
| ·酶法 | 第13-14页 |
| ·基因工程在谷氨酰胺生产中的应用 | 第14-15页 |
| ·谷氨酰胺合成酶 | 第15-21页 |
| ·典型细菌的谷氨酰胺合成酶(GSI)结构 | 第15-17页 |
| ·细菌 GS 酶催化机理 | 第17-18页 |
| ·细菌 GS 酶活性调控 | 第18-20页 |
| ·谷氨酸棒杆菌中的谷氨酰胺合成酶 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第21-22页 |
| ·概述 | 第21页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构成 | 第21页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第21-22页 |
| ·代谢工程 | 第22-24页 |
| ·本论文的意义和目的 | 第24-26页 |
| 第2章 GS 酶与6×His 融合表达 | 第26-40页 |
| ·引言 | 第26-27页 |
| ·材料与方法 | 第27-31页 |
| ·实验材料 | 第27-29页 |
| ·实验方法 | 第29-31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-39页 |
| ·分子生物学构建过程 | 第31-34页 |
| ·带有不同位置His-tag 的重组GS 的表达 | 第34-36页 |
| ·C 端His-tag 导致重组GS 酶完全不可溶表达的机理分析 | 第36-38页 |
| ·GS 包涵体复性初步研究 | 第38-39页 |
| ·本章小结 | 第39-40页 |
| 第3章 促进重组GS 酶可溶性表达的探索 | 第40-55页 |
| ·引言 | 第40-41页 |
| ·材料与方法 | 第41-44页 |
| ·实验材料 | 第41-43页 |
| ·实验方法 | 第43-44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-53页 |
| ·重组质粒和菌株构建策略及构建过程 | 第44-51页 |
| ·目标蛋白的表达 | 第51-53页 |
| ·本章小结 | 第53-55页 |
| 第4章 重组GS 酶的纯化与酶学性质研究 | 第55-73页 |
| ·引言 | 第55页 |
| ·材料与方法 | 第55-58页 |
| ·表达菌株 | 第55页 |
| ·仪器和试剂 | 第55-56页 |
| ·培养基 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-72页 |
| ·诱导重组大肠杆菌表达GS 条件的优化 | 第58-60页 |
| ·带有 His-tag 的重组GS 的纯化 | 第60-64页 |
| ·重组 GS 酶学性质研究 | 第64-72页 |
| ·本章小结 | 第72-73页 |
| 第5章 GS 的腺苷化现象研究 | 第73-83页 |
| ·引言 | 第73页 |
| ·材料与方法 | 第73-75页 |
| ·表达菌株 | 第73页 |
| ·仪器和试剂 | 第73页 |
| ·培养基 | 第73-74页 |
| ·实验方法 | 第74-75页 |
| ·结果与讨论 | 第75-82页 |
| ·本章小结 | 第82-83页 |
| 第6章 结论和展望 | 第83-87页 |
| ·结论 | 第83-84页 |
| ·本论文的创新点 | 第84-85页 |
| ·展望 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 附录A 仪器与设备 | 第92-93页 |
| 附录B 常用生化试剂 | 第93-94页 |
| 附录C 培养基和缓冲液配制 | 第94-95页 |
| 附录D 聚合酶链式反应（PCR） | 第95-96页 |
| 附录E 酶切与连接 | 第96-98页 |
| 附录F 琼脂糖凝胶电泳 | 第98-99页 |
| 附录G E. coli 感受态细胞的转化 | 第99-100页 |
| 附录H 菌株的培养及表达 | 第100-101页 |
| 附录I 考马斯亮蓝法(Bradford 法)测定蛋白浓度 | 第101-102页 |
| 附录J 谷氨酰胺合成酶活性测定方法 | 第102-105页 |
| 附录K SDS-PAGE 蛋白质电泳 | 第105-108页 |
| 附录L E. coli 感受态细胞的制备 | 第108-109页 |
| 附录M 凝胶层析（Gel-filtration Chromatography）操作步骤 | 第109-110页 |
| 附录N 固定化金属离子螯合亲和层析色谱(IMAC) | 第110-112页 |
| 个人简历和在学期间发表的学术论文 | 第112页 |
