| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 插图和附表清单 | 第12-13页 |
| 缩略词 | 第13-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-33页 |
| ·铝对植物的毒害 | 第15-16页 |
| ·植物耐铝机制 | 第16-17页 |
| ·植物分子耐铝机制 | 第17-19页 |
| ·植物铝胁迫响应基因的分离鉴定 | 第17-18页 |
| ·铝胁迫响应蛋白的分离与鉴定 | 第18-19页 |
| ·蚕豆铝胁迫研究进展 | 第19-21页 |
| ·14-3-3蛋白简介 | 第21-23页 |
| ·14-3-3蛋白家族的种类、分布及功能 | 第23-26页 |
| ·14-3-3蛋白种类 | 第23-24页 |
| ·14-3-3蛋白在细胞中的定位 | 第24-25页 |
| ·14-3-3蛋白功能的多样性 | 第25-26页 |
| ·14-3-3蛋白对植物各种生理活动过程的调控 | 第26-31页 |
| ·14-3-3蛋白对种子萌发发育过程的作用 | 第26-27页 |
| ·14-3-3蛋白对植物碳水化合物代谢的调控 | 第27-28页 |
| ·14-3-3蛋白对植物氮素营养代谢的调控 | 第28-29页 |
| ·14-3-3蛋白对植物体内物质运输的调控 | 第29页 |
| ·14-3-3蛋白在植物逆境非生物胁迫反应中的作用 | 第29-31页 |
| ·蛋白质相互作用组学研究 | 第31-32页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第32-33页 |
| 第二章 材料与方法 | 第33-54页 |
| ·材料 | 第33-35页 |
| ·植物、菌株和质粒 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33-34页 |
| ·主要培养基 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-54页 |
| ·植物培养及处理 | 第35页 |
| ·引物合成 | 第35页 |
| ·引物稀释 | 第35-36页 |
| ·植物总RNA提取 | 第36-37页 |
| ·PCR扩增14-3-3b基因 | 第37-39页 |
| ·DNA电泳检测以及胶回收 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第40-41页 |
| ·PCR产物的TA克隆 | 第41页 |
| ·质粒的提取方法 | 第41-43页 |
| ·质粒酶切检测 | 第43页 |
| ·目的基因片段与原核载体的连接 | 第43-44页 |
| ·目的蛋白重组菌的构建表达与蛋白纯化方法 | 第44-47页 |
| ·免疫共沉淀法分离筛选14-3-3b互作蛋白 | 第47-49页 |
| ·蛋白质谱分析鉴定 | 第49页 |
| ·Far-western Blotting检测 | 第49-51页 |
| ·GST-pull-down法验证14-3-3b互作蛋白 | 第51页 |
| ·表达谱分析互作蛋白的基因 | 第51-54页 |
| 第三章 实验结果 | 第54-71页 |
| ·铝胁迫下蚕豆14-3-3b基因表达谱分析 | 第54-55页 |
| ·材料处理 | 第54页 |
| ·50μM铝胁迫处理蚕豆时间梯度的表达谱 | 第54-55页 |
| ·pGEX-4-1-14-3-3b原核表达载体的构建 | 第55-61页 |
| ·pMD18-T-14-3-3b TA克隆载体的构建策略 | 第55-56页 |
| ·pMD18-T-14-3-3b TA克隆载体的构建 | 第56-59页 |
| ·pGEX-4T-14-3-3b原核表达载体的构建策略 | 第59页 |
| ·pGEX-4T-1-14-3-3b原核表达载体的构建 | 第59-61页 |
| ·14-3-3b重组蛋白的表达及纯化 | 第61-65页 |
| ·14-3-3b重组蛋白表达条件的优化 | 第61-62页 |
| ·14-3-3b-GST重组蛋白表达形式的鉴定 | 第62-63页 |
| ·14-3-3b重组蛋白的亲和纯化 | 第63-65页 |
| ·铝胁迫下14-3-3b蛋白相互作用蛋白分析及鉴定 | 第65-67页 |
| ·14-3-3b重组蛋白抗体检测 | 第65页 |
| ·铝胁迫下14-3-3b蛋白相互作用蛋白的分离 | 第65-66页 |
| ·铝胁迫下14-3-3b蛋白相互作用蛋白的质谱分析结果 | 第66-67页 |
| ·14-3-3b重组蛋白互作蛋白验证及表达谱分析 | 第67-71页 |
| ·Far-western验证14-3-3b蛋白与互作蛋白 | 第67-68页 |
| ·GST-Pull-down法验证14-3-3b蛋白与互作蛋白 | 第68-69页 |
| ·14-3-3b蛋白相互作用蛋白的基因RNA水平的表达谱分析 | 第69-71页 |
| 第四章 讨论 | 第71-77页 |
| ·体内外检测铝胁迫下蚕豆14-3-3b蛋白相互作用蛋白的区别 | 第71-72页 |
| ·铝胁迫下蚕豆14-3-3b蛋白相互作用蛋白的应答机制探讨 | 第72-77页 |
| ·铝胁迫下蚕豆14-3-3b蛋白与3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)相互作用参与碳代谢 | 第72-74页 |
| ·铝胁迫下蚕豆14-3-3b蛋白与NADH脱氢酶相互作用的机制探讨 | 第74-77页 |
| 第五章 总结与展望 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-95页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文 | 第95页 |
