| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 主要英文缩写词及译文 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1 木聚糖酶简介 | 第13-16页 |
| ·木聚糖酶的分类 | 第13-14页 |
| ·木聚糖酶的特性 | 第14页 |
| ·木聚糖酶的应用 | 第14-16页 |
| 2 谷物中的木聚糖酶抑制剂蛋白 | 第16-17页 |
| ·木聚糖酶抑制剂的分类 | 第16-17页 |
| ·木聚糖酶抑制剂的抑制作用 | 第17页 |
| 3 谷物中XP型木聚糖酶抑制剂 | 第17-21页 |
| ·小麦中的XIP型木聚糖酶抑制剂 | 第18页 |
| ·水稻中的XP型木聚糖酶抑制剂 | 第18-20页 |
| ·其它谷物中的XIP型木聚糖酶抑制剂 | 第20-21页 |
| ·谷物中XIP型木聚糖酶抑制剂序列分析 | 第21页 |
| 4 木聚糖酶抑制剂蛋白的表达 | 第21-23页 |
| ·木聚糖酶抑制剂基因在大肠杆菌中的表达 | 第22页 |
| ·木聚糖酶抑制剂基因在毕赤酵母中的表达 | 第22-23页 |
| 5 研究目的及意义 | 第23-24页 |
| 第二章 研究工作报告 | 第24-57页 |
| 一 水稻XIP型木聚糖酶抑制剂基因的克隆及序列分析 | 第24-37页 |
| 1 试验策略 | 第24-25页 |
| ·克隆策略 | 第24-25页 |
| ·亚克隆策略 | 第25页 |
| 2 试验材料 | 第25-26页 |
| 3 试验方法 | 第26-33页 |
| ·水稻种子预处理 | 第26-27页 |
| ·水稻基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·水稻木聚糖酶抑制剂基因rixi的克隆 | 第28-31页 |
| ·木聚糖酶抑制剂基因rixi的序列测定 | 第31页 |
| ·木聚糖酶抑制剂基因rixi的亚克隆 | 第31-33页 |
| 4 试验结果 | 第33-37页 |
| ·水稻基因组DNA提取 | 第33页 |
| ·木聚糖酶抑制剂基因rixi的PCR扩增 | 第33页 |
| ·阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第33-34页 |
| ·木聚糖酶抑制剂的核苷酸序列分析 | 第34-36页 |
| ·亚克隆中木聚糖酶抑制剂基因crixi的PCR扩增 | 第36页 |
| ·亚克隆阳性克隆子pUCm-T crixi的筛选与鉴定 | 第36-37页 |
| 二 水稻XIP型木聚糖酶抑制剂基因在大肠杆菌中的表达 | 第37-44页 |
| 1 表达策略 | 第37-38页 |
| 2 试验材料 | 第38-39页 |
| 3 试验方法 | 第39-41页 |
| ·重组质粒T-crixi的双酶切 | 第39页 |
| ·表达载体pET-30a(+)的双酶切 | 第39页 |
| ·木聚糖酶抑制剂基因与表达载体的连接 | 第39页 |
| ·感受态细胞E.coli BL21的制备 | 第39页 |
| ·转化 | 第39页 |
| ·阳性质粒的筛选 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌工程菌的培养 | 第40页 |
| ·重组木聚糖酶抑制剂活性测定 | 第40页 |
| ·重组木聚糖酶抑制剂活性定义 | 第40页 |
| ·标准曲线制作 | 第40-41页 |
| ·包涵体的复性 | 第41页 |
| ·数据处理与统计分析 | 第41页 |
| 4 试验结果 | 第41-44页 |
| ·重组质粒T-crixi的双酶切 | 第41页 |
| ·表达载体pET-30a(+)的双酶切 | 第41-42页 |
| ·木聚糖酶抑制剂阳性表达子的双酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组抑制剂蛋白对不同来源木聚糖酶的抑制活性 | 第43-44页 |
| 三 水稻XIP型木聚糖酶抑制剂基因在毕赤酵母中的表达 | 第44-57页 |
| 1 表达策略 | 第44-45页 |
| 2 试验材料 | 第45-47页 |
| 3 试验方法 | 第47-53页 |
| ·木聚糖酶抑制剂成熟肽基因mrixi的PCR扩增 | 第47-48页 |
| ·PCR产物电泳 | 第48页 |
| ·重组质粒的双酶切 | 第48页 |
| ·穿梭载体pPIC9K的双酶切 | 第48-49页 |
| ·pPIC9K-mrixi质粒的构建 | 第49页 |
| ·E.coli TOP1OF'感受态细胞的制备与转化以及阳性质粒的筛选鉴定 | 第49页 |
| ·重组质粒的大量提取 | 第49-50页 |
| ·重组质粒的线性化 | 第50页 |
| ·单酶切后的质粒浓缩 | 第50页 |
| ·毕赤酵母菌株GS115感受态细胞的制备 | 第50-51页 |
| ·电击转化 | 第51页 |
| ·酵母转化子的筛选 | 第51-52页 |
| ·酵母阳性转化子基因组的提取 | 第52页 |
| ·酵母阳性转化子的PCR鉴定 | 第52-53页 |
| ·酵母工程菌的培养 | 第53页 |
| ·重组木聚糖酶抑制剂活性测定 | 第53页 |
| 4 试验结果 | 第53-57页 |
| ·木聚糖酶抑制剂成熟肽基因mrixi的PCR扩增 | 第53-54页 |
| ·穿梭载体pPIC9K的EcoRI和NotI的双酶切 | 第54页 |
| ·木聚糖酶抑制剂基因mrixi与pPIC9K的连接及阳性重组子的筛选 | 第54-55页 |
| ·重组质粒9K-mrixi的大量提取 | 第55页 |
| ·酵母重组子快慢斑筛选 | 第55页 |
| ·酵母重组子的PCR鉴定 | 第55-56页 |
| ·重组抑制剂蛋白对不同来源木聚糖酶的抑制活性 | 第56-57页 |
| 四 不同表达系统重组木聚糖酶抑制剂的抑制特性研究 | 第57-66页 |
| 1 试验材料 | 第57-58页 |
| 2 试验方法 | 第58-60页 |
| ·重组木聚糖酶抑制剂抑制特性分析 | 第58页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第58-60页 |
| ·数据处理与统计分析 | 第60页 |
| 3 试验结果 | 第60-66页 |
| ·不同表达系统水稻木聚糖酶抑制剂的SDS-PAGE电泳分析 | 第60-62页 |
| ·反应温度对抑制剂活性的影响 | 第62-63页 |
| ·反应时间对抑制剂活性的影响 | 第63-64页 |
| ·重组抑制剂蛋白的热稳定性 | 第64页 |
| ·重组抑制剂蛋白的剂量效应 | 第64-66页 |
| 五 讨论 | 第66-69页 |
| 1 木聚糖酶抑制剂在大肠杆菌中的表达 | 第66-67页 |
| 2 木聚糖酶抑制剂在毕赤酵母中的表达 | 第67页 |
| 3 木聚糖酶抑制剂抑制活性的研究 | 第67-69页 |
| 六 小结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 附录一 pUCM-T vector | 第77-78页 |
| 附录二 pET-30a(+)Vevtor | 第78-79页 |
| 附录三 pPIC9K Vector | 第79-80页 |
| 作者简历 | 第80页 |
