| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 引言 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-24页 |
| 1.1 硒与硒蛋白 | 第9-12页 |
| 1.1.1 硒元素 | 第9页 |
| 1.1.2 硒代半胱氨酸 | 第9页 |
| 1.1.3 硒掺入多肽链的路径 | 第9-11页 |
| 1.1.4 硒蛋白 | 第11-12页 |
| 1.2 哺乳动物硫氧还蛋白还原酶(TrxR) | 第12-15页 |
| 1.2.1 TrxR的类型和功能 | 第12页 |
| 1.2.2 TrxR的结构和性质 | 第12-14页 |
| 1.2.3 与TrxR相关的研究领域 | 第14-15页 |
| 1.3 硒蛋白的表达 | 第15-16页 |
| 1.3.1 原核表达 | 第15-16页 |
| 1.3.2 真核表达 | 第16页 |
| 1.4 硒蛋白的纯化 | 第16-22页 |
| 1.4.1 疏水层析介质 | 第16-17页 |
| 1.4.2 亲和层析介质 | 第17-18页 |
| 1.4.3 离子交换层析介质 | 第18-19页 |
| 1.4.4 凝胶过滤层析介质 | 第19-21页 |
| 1.4.5 分离纯化策略 | 第21-22页 |
| 1.5 本论文选题依据和研究内容 | 第22-24页 |
| 1.5.1 选题依据 | 第22-23页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第23-24页 |
| 2 硒蛋白TrxR1的活性表达研究 | 第24-33页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第24-25页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-27页 |
| 2.3.1 TrxR1的摇瓶表达 | 第25页 |
| 2.3.2 TrxR1酶活力测试 | 第25-26页 |
| 2.3.3 TrxR1酶浓度测试 | 第26页 |
| 2.3.4 TrxR1的发酵表达 | 第26-27页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第27-32页 |
| 2.4.1 核黄素前体riboflavin对TrxR1原核表达的影响 | 第27-28页 |
| 2.4.2 Mg~(2+)对TrxR1原核表达的影响 | 第28-29页 |
| 2.4.3 Mn~(2+)对TrxR1原核表达的影响 | 第29-30页 |
| 2.4.4 Ca~(2+)对TrxR1原核表达的影响 | 第30-31页 |
| 2.4.5 TrxR1的发酵表达生长曲线 | 第31-32页 |
| 2.5 小结 | 第32-33页 |
| 3 硒蛋白TrxR1的分离纯化 | 第33-55页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第33-35页 |
| 3.2.1 材料与试剂 | 第33-34页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第34-35页 |
| 3.3 实验方法 | 第35-37页 |
| 3.3.1 TrxR1粗蛋白制备 | 第35页 |
| 3.3.2 Blue Sepharose亲和层析 | 第35-36页 |
| 3.3.3 ADP Sepharose亲和层析 | 第36页 |
| 3.3.4 DEAE Sepharose阴离子交换层析 | 第36-37页 |
| 3.3.5 SephacrylS-300凝胶过滤层析 | 第37页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第37-54页 |
| 3.4.1 Blue Sepharose和ADP Sepharose亲和层析结果比较 | 第37-41页 |
| 3.4.2 ADP Sepharose亲和层析的工艺优化 | 第41-43页 |
| 3.4.3 ADP Sepharose亲和层析柱效下降 | 第43-44页 |
| 3.4.4 螯合剂EDTA保护ADP配基提高TrxR1亲和层析收率 | 第44-45页 |
| 3.4.5 DEAE Sepharose保护ADP配基提高TrxR1亲和层析收率 | 第45-47页 |
| 3.4.6 缓冲液pH对离子交换层析纯化效果的影响 | 第47-49页 |
| 3.4.7 增大洗脱体积对离子交换层析纯化效果的影响 | 第49-50页 |
| 3.4.8 SephacrylS-300凝胶过滤结果 | 第50-54页 |
| 3.5 小结 | 第54-55页 |
| 4 硒蛋白TrxR1分离纯化策略的优化 | 第55-64页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第55-56页 |
| 4.2.1 材料与试剂 | 第55页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第55-56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56页 |
| 4.3.1 TrxR1的分离纯化流程 | 第56页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第56-63页 |
| 4.4.1 ADP Sepharose与SephacrylS-300联用纯化TrxR | 第56-59页 |
| 4.4.2 重金属离子对TrxR1酶活力的抑制 | 第59-63页 |
| 4.5 小结 | 第63-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 附录A TrxR1碱基序列 | 第70-71页 |
| 附录B TrxR1氨基酸序列 | 第71-72页 |
| 附录C 常用溶液配置 | 第72-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-78页 |
