| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-18页 |
| 1.1 c-di-AMP | 第9-10页 |
| 1.2 c-di-GMP | 第10-12页 |
| 1.3 cGAMP | 第12-13页 |
| 1.4 VC0179 | 第13-14页 |
| 1.5 核酸适配体 | 第14-18页 |
| 1.5.1 核酸适配体的本质、作用机制及其应用 | 第14-16页 |
| 1.5.2 核酸适配体检测c-di-GMP和CGAMP | 第16-18页 |
| 2 引言 | 第18-19页 |
| 3 材料和与方法 | 第19-32页 |
| 3.1 实验材料 | 第19-22页 |
| 3.1.1 菌种 | 第19页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 3.1.3 常规试剂及配制 | 第19-22页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第22页 |
| 3.2 方法 | 第22-32页 |
| 3.2.1 RNA适配体的制备 | 第22-26页 |
| 3.2.1.1 RNA适配体的结构和机理 | 第22-23页 |
| 3.2.1.2 引物的设计与合成 | 第23-24页 |
| 3.2.1.3 PCR扩增及纯化 | 第24页 |
| 3.2.1.4 DNA的体外转录及纯化 | 第24-25页 |
| 3.2.1.5 纯化后的RNA通过非变性RNAPAGE胶检测 | 第25-26页 |
| 3.2.2 VC0179蛋白的制备 | 第26页 |
| 3.2.3 利用VC0179蛋白体外酶促反应合成c-di-GMP | 第26-27页 |
| 3.2.4 利用VC0179蛋白体外酶促反应合成cGAMP | 第27页 |
| 3.2.5 RNA适配体与c-di-GMP和cGAMP在不同浓度的K+、Mg2+溶液中结合 | 第27页 |
| 3.2.6 RNA适配体与c-di-GMP和cGAMP结合不同的时间 | 第27-28页 |
| 3.2.7 不同浓度的RNA适配体与c-di-GMP和cGAMP结合 | 第28页 |
| 3.2.8 RNA适配体、c-di-GMP和cGAMP与不同浓度的染料结合 | 第28页 |
| 3.2.9 不同浓度VC0179蛋白的酶促反应产物与RNA适配体结合 | 第28-29页 |
| 3.2.10 RNA适配体与不同浓度的c-di-GMP和cGAMP标准品结合 | 第29-30页 |
| 3.2.11 RNA适配体与不同底物结合 | 第30页 |
| 3.2.12 转录后RNA适配体混合物检测体外酶促合成c-di-GMP和cGAMP | 第30-32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-39页 |
| 4.1 RNA适配体的检测 | 第32页 |
| 4.2 VC1079蛋白诱导表达纯化后的SDS-PAGE电泳检测 | 第32-33页 |
| 4.3 K~+、Mg~(2+)浓度对RNA适配体检测c-di-GMP和cGAMP的影响 | 第33页 |
| 4.4 结合时间不同对RNA适配体检测c-di-GMP和cGAMP的影响 | 第33-34页 |
| 4.5 RNA适配体的浓度对c-di-GMP和cGAMP检测的影响 | 第34页 |
| 4.6 不同浓度的染料对RNA适配体检测c-di-GMP和cGAMP的影响 | 第34-35页 |
| 4.7 RNA适配体检测VC0179蛋白的催化效率 | 第35-36页 |
| 4.8 RNA适配体对c-di-GMP和cGAMP检测灵敏度和检测极限 | 第36页 |
| 4.9 RNA适配体对c-di-GMP和cGAMP的选择性 | 第36-37页 |
| 4.10 未纯化RNA适配体检测VC0179体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP | 第37-39页 |
| 5 讨论与结论 | 第39-41页 |
| 5.1 讨论 | 第39-40页 |
| 5.2 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-50页 |
| 英文摘要 | 第50-51页 |
