| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 符号和缩略词说明 | 第20-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-31页 |
| 1.1 T7表达系统概述 | 第21-23页 |
| 1.1.1 T7表达系统特点 | 第21-23页 |
| 1.1.2 T7表达系统在合成生物学中的重要性 | 第23页 |
| 1.2 单质粒T7表达系统概述 | 第23-26页 |
| 1.2.1 T7表达系统的成熟应用方案 | 第23-24页 |
| 1.2.2 单质粒T7表达系统研究进展 | 第24-26页 |
| 1.3 T7 RNAP转录通读概述 | 第26-29页 |
| 1.3.1 终止子简介 | 第26-27页 |
| 1.3.2 转录通读 | 第27页 |
| 1.3.3 T7 RNAP转录通读 | 第27-29页 |
| 1.4 本论文的研究目的与意义 | 第29页 |
| 1.5 本论文的主要研究内容 | 第29-31页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第31-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-34页 |
| 2.1.1 原始菌种与质粒 | 第31-32页 |
| 2.1.2 工具酶与试剂 | 第32页 |
| 2.1.3 菌种培养条件与配方 | 第32-33页 |
| 2.1.4 抗生素 | 第33页 |
| 2.1.5 专业软件 | 第33-34页 |
| 2.2 常用反应体系 | 第34-39页 |
| 2.2.1 PCR扩增反应体系 | 第34-36页 |
| 2.2.2 PCR扩增程序 | 第36-37页 |
| 2.2.3 T4连接酶反应体系 | 第37-38页 |
| 2.2.4 限制性内切酶反应体系 | 第38-39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-40页 |
| 2.3.1 流式细胞仪测定菌体荧光分布 | 第39页 |
| 2.3.2 荧光测定方法 | 第39页 |
| 2.3.3 D-甘露糖异构酶酶活快速测定方法 | 第39-40页 |
| 2.4 终止子挖掘 | 第40-41页 |
| 第三章 T7转录筛选器的构建 | 第41-57页 |
| 3.1 引论 | 第41页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第41-45页 |
| 3.2.1 本章构建的质粒总结 | 第41页 |
| 3.2.2 操作方法与反应体系 | 第41-44页 |
| 3.2.3 PCR引物名称及对应的扩增片段 | 第44-45页 |
| 3.3 T7转录筛选器的构建 | 第45-51页 |
| 3.3.1 1×GFP基因T7转录筛选器构建过程 | 第45-49页 |
| 3.3.2 2×GFP基因T7转录筛选器构建过程 | 第49-50页 |
| 3.3.3 其他基因T7转录筛选器构建过程 | 第50-51页 |
| 3.4 lac启动子转录筛选器的构建 | 第51-52页 |
| 3.5 实验结果与讨论 | 第52-57页 |
| 3.5.1 1×GFP基因T7转录筛选器转化及验证 | 第52-53页 |
| 3.5.2 2×GFP基因T7转录筛选器转化及验证 | 第53-54页 |
| 3.5.3 fmi/lacZ基因T7转录筛选器转化及验证 | 第54-55页 |
| 3.5.4 lac启动子转录筛选器的转化及验证 | 第55-57页 |
| 第四章 T7转录筛选器工作效率影响因素的研究 | 第57-69页 |
| 4.1 引论 | 第57页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第57-61页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第57-59页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第59-61页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第61-67页 |
| 4.3.1 壮观霉素重组菌的生长曲线研究 | 第61-62页 |
| 4.3.2 T7和大肠杆菌转录系统的通读能力比较 | 第62-63页 |
| 4.3.3 不同终止子对T7转录系统通读能力的影响 | 第63-64页 |
| 4.3.4 不同壮观霉素浓度对T7转录筛选器的影响 | 第64-65页 |
| 4.3.5 基因长度对T7转录筛选器的影响 | 第65-66页 |
| 4.3.6 基因结构对T7转录筛选器的影响 | 第66-67页 |
| 4.4 本章小结 | 第67-69页 |
| 第五章 利用筛选器维持T7转录系统稳定性研究 | 第69-79页 |
| 5.1 引论 | 第69页 |
| 5.2 实验材料与方法 | 第69-70页 |
| 5.2.1 质粒与菌株 | 第69页 |
| 5.2.2 培养基 | 第69-70页 |
| 5.3 实验方法 | 第70-71页 |
| 5.3.1 大肠杆菌对壮观霉素的敏感性实验 | 第70页 |
| 5.3.2 筛选器的传代实验 | 第70-71页 |
| 5.4 实验结果与分析 | 第71-78页 |
| 5.4.1 筛选器关闭条件下T7转录系统稳定性变化 | 第71-73页 |
| 5.4.2 T7转录筛选器对1×GFP转录稳定性的影响 | 第73-78页 |
| 5.5 本章小结 | 第78-79页 |
| 第六章 筛选器维持T7转录系统稳定的适用性研究 | 第79-93页 |
| 6.1 引论 | 第79页 |
| 6.2 实验材料与方法 | 第79-82页 |
| 6.2.1 质粒与菌株 | 第79-80页 |
| 6.2.2 培养基 | 第80页 |
| 6.2.3 操作方法与反应体系 | 第80-81页 |
| 6.2.4 PCR引物名称及对应的扩增片段 | 第81页 |
| 6.2.5 实验材料 | 第81-82页 |
| 6.3 实验方法 | 第82-85页 |
| 6.3.1 筛选器的传代实验 | 第82页 |
| 6.3.2 筛选器在P.putida KT2440中的验证 | 第82-85页 |
| 6.4 实验结果与分析 | 第85-92页 |
| 6.4.1 T7转录筛选器对2×GFP转录稳定性的影响 | 第85-87页 |
| 6.4.2 fmi和lacZ筛选器对T7转录系统的影响 | 第87-89页 |
| 6.4.3 重组质粒pATK-ZBD-99-Gm-no CAP的构建与验证 | 第89-90页 |
| 6.4.4 T7转录筛选器应用于P.putida KT2440初步功能验证 | 第90-92页 |
| 6.5 本章小结 | 第92-93页 |
| 第七章 结论与展望 | 第93-95页 |
| 7.1 结论 | 第93-94页 |
| 7.2 展望 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-101页 |
| 附录1 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第101-102页 |
| 附录2 E. coli超级感受态的制备方法 | 第102-104页 |
| 附录3 质粒或连接产物转化E. coli感受态细胞 | 第104-105页 |
| 附录4 大肠杆菌菌落PCR方法 | 第105-106页 |
| 附录5 不同终止子序列 | 第106-108页 |
| 附录6 SDS-PAGE凝胶电泳的操作方法 | 第108-110页 |
| 附录7 测序结果比对 | 第110-115页 |
| 附录8 试剂及药品总结 | 第115-116页 |
| 附录9 仪器总结 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第119-121页 |
| 作者和导师简介 | 第121-122页 |
| 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第122-123页 |
