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炎性小体细胞传感方法的建立及光甘草定干预机制研究

摘要第3-5页
Abstract第5-6页
缩略语索引第10-11页
第一章 绪论第11-21页
    1.1 炎症及炎症反应第11-14页
        1.1.1 炎症与代谢紊乱第11页
        1.1.2 脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)第11-12页
        1.1.3 NLRP3受体通路第12-13页
        1.1.4 TLR4受体通路第13-14页
    1.2 抗炎策略第14-17页
        1.2.1 2种抗炎策略第14页
        1.2.2 抗炎活性多酚第14-16页
        1.2.3 抗炎干预新靶点-NLRP3炎性小体第16-17页
    1.3 荧光细胞传感器第17-18页
    1.4 代谢组学第18-19页
        1.4.1 代谢组学概述第18-19页
        1.4.2 代谢组学与抗炎症第19页
    1.5 立题背景及意义第19-20页
    1.6 本课题主要研究内容第20-21页
第二章 以促炎细胞因子为靶点评价多酚的抗炎症活性第21-32页
    2.1 材料和仪器第21页
        2.1.1 材料及试剂第21页
        2.1.2 仪器和设备第21页
    2.2 实验方法第21-24页
        2.2.1 细胞培养及刺激第21-22页
        2.2.2 CCK-8检测细胞活性第22页
        2.2.3 检测胞内一氧化氮浓度第22页
        2.2.4 总RNA的抽提第22页
        2.2.5 反转录实验第22-23页
        2.2.6 RT-PCR操作第23页
        2.2.7 ELISA测定促炎症细胞因子浓度第23-24页
        2.2.8 统计分析第24页
    2.3 结果与讨论第24-30页
        2.3.1 各物质作用浓度的确定第24-25页
        2.3.2 LPS刺激使细胞发生炎症反应第25-27页
        2.3.3 多酚抑制了LPS刺激导致的一氧化氮累积第27页
        2.3.4 多酚对炎症细胞因子的干预第27-30页
    2.4 本章小结第30-32页
第三章 NLRP3荧光细胞传感器的构建及应用第32-48页
    3.1 材料和仪器第32页
        3.1.1 材料及试剂第32页
        3.1.2 仪器和设备第32页
    3.2 实验方法第32-35页
        3.2.1 THP-1细胞培养第32-33页
        3.2.2 质粒的构建第33页
        3.2.3 病毒感染THP-1细胞第33页
        3.2.4 稳转细胞系的筛选和构建第33-34页
        3.2.5 RT-PCR实验第34页
        3.2.6 Western实验第34-35页
        3.2.7 细胞活力第35页
        3.2.8 细胞内活性氧检测第35页
        3.2.9 细胞内线粒体活性氧检测第35页
        3.2.10 细胞内线粒体膜电位检测第35页
        3.2.11 细胞内钙离子检测第35页
        3.2.12 统计分析第35页
    3.3 结果与讨论第35-46页
        3.3.1 荧光细胞传感器的原理第35-36页
        3.3.2 质粒的成功构建第36-37页
        3.3.3 转染后细胞活力评价第37-38页
        3.3.4 荧光细胞传感器的建立及验证第38-41页
        3.3.5 NLRP3激活抑制剂的筛选第41-42页
        3.3.6 光甘草定抑制NLRP3炎性小体机理初探第42-46页
    3.4 本章小结第46-48页
第四章 代谢组学揭示光甘草定的抗炎症功能第48-61页
    4.1 材料和仪器第48页
        4.1.1 材料及试剂第48页
        4.1.2 仪器和设备第48页
    4.2 实验方法第48-50页
        4.2.1 实验分组第48页
        4.2.2 细胞培养第48页
        4.2.3 代谢物萃取第48-49页
        4.2.4 代谢物衍生化第49页
        4.2.5 气相色谱-质谱联用分析第49页
        4.2.6 代谢数据处理第49页
        4.2.7 多元统计分析及通路分析第49-50页
    4.3 结果与讨论第50-59页
        4.3.1 代谢物鉴定第50-51页
        4.3.2 代谢物谱的多元统计分析第51-55页
        4.3.3 代谢通路分析第55-59页
    4.4 本章小结第59-61页
主要结论和展望第61-63页
    主要结论第61-62页
    展望第62-63页
致谢第63-64页
参考文献第64-71页
附录A:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第71页

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