| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 英文缩写词 | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-20页 |
| 1 脂肪干细胞 | 第10-12页 |
| 2 脂肪代谢 | 第12-14页 |
| 2.1 ATGL：脂肪分解的初始步骤 | 第13页 |
| 2.2 HSL：主要的DG脂肪酶 | 第13页 |
| 2.3 MGL：脂肪分解的最后一步 | 第13页 |
| 2.4 脂滴相关蛋白在脂解中的作用 | 第13-14页 |
| 3 生长分化因子11(GDF11) | 第14-18页 |
| 3.1 GDF11的结构 | 第14-15页 |
| 3.2 GDF11的表达和分布 | 第15-16页 |
| 3.3 GDF11的信号通路 | 第16页 |
| 3.4 GDF11的功能 | 第16-18页 |
| 3.4.1 GDF11在肌肉组织发育中的作用 | 第16页 |
| 3.4.2 GDF11在神经系统发育中的作用 | 第16-17页 |
| 3.4.3 GDF11在消化腺发育中的作用 | 第17页 |
| 3.4.4 GDF11在泌尿生殖系统发育中的作用 | 第17页 |
| 3.4.5 GDF11在骨骼发育中的作用 | 第17-18页 |
| 3.4.6 GDF11在抗衰老与心血管疾病中的作用 | 第18页 |
| 4 研究意义 | 第18-19页 |
| 5 技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 GDF11的表达及纯化 | 第20-34页 |
| 1 引言 | 第20页 |
| 2 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1 实验菌株、细胞与质粒 | 第20页 |
| 2.2 仪器与设备 | 第20-21页 |
| 2.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.4 本章所需核酸片段与引物序列 | 第22页 |
| 3 主要试剂配方 | 第22-23页 |
| 4 实验方法 | 第23-30页 |
| 4.1 质粒提取 | 第23-24页 |
| 4.2 感受态细菌的制备及转化 | 第24页 |
| 4.3 PCR扩增目的片段 | 第24-25页 |
| 4.4 琼脂糖核酸电泳 | 第25页 |
| 4.5 胶回收 | 第25-26页 |
| 4.6 目的片段和质粒的双酶切以及连接 | 第26-27页 |
| 4.7 重组质粒的鉴定 | 第27页 |
| 4.8 CHO细胞培养与转染 | 第27-28页 |
| 4.9 转染子鉴定 | 第28-29页 |
| 4.10 GDF11蛋白的表达鉴定与纯化 | 第29页 |
| 4.11 GDF11活性鉴定 | 第29-30页 |
| 5 实验结果 | 第30-33页 |
| 5.1 pcDNA3.1~+-KSH-DHFR重组质粒的构建 | 第30-31页 |
| 5.2 pcDNA3.1~+-KSH-DHFR-GDF11重组质粒的构建 | 第31-32页 |
| 5.3 转染和筛选稳定的转染子以及GDF11蛋白的表达纯化 | 第32-33页 |
| 5.4 GDF11蛋白活性鉴定 | 第33页 |
| 6 讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 GDF11对脂肪干细胞增殖和成脂分化的影响 | 第34-48页 |
| 1 引言 | 第34页 |
| 2 实验材料 | 第34-36页 |
| 2.1 细胞 | 第34页 |
| 2.2 仪器与设备 | 第34页 |
| 2.3 主要试剂 | 第34-35页 |
| 2.4 本章所涉及相关基因的引物 | 第35-36页 |
| 3 主要试剂配方 | 第36页 |
| 4 实验方法 | 第36-42页 |
| 4.1 脂肪干细胞的分离提取 | 第36-37页 |
| 4.2 脂肪干细胞鉴定 | 第37-38页 |
| 4.3 细胞冻存 | 第38页 |
| 4.4 细胞复苏与培养 | 第38页 |
| 4.5 细胞传代或铺板 | 第38页 |
| 4.6 脂肪干细胞增殖实验 | 第38页 |
| 4.7 脂肪干细胞周期检测 | 第38-39页 |
| 4.8 脂肪干细胞成脂分化 | 第39页 |
| 4.9 油红O染色 | 第39页 |
| 4.10 茜素红染色 | 第39-40页 |
| 4.11 甲苯胺蓝染色 | 第40页 |
| 4.12 RNA提取与q-PCR | 第40页 |
| 4.13 细胞总蛋白质的抽提 | 第40-41页 |
| 4.14 蛋白质浓度的测定及调整 | 第41页 |
| 4.15 Westernblotting | 第41-42页 |
| 4.16 统计分析 | 第42页 |
| 5 实验结果 | 第42-47页 |
| 5.1 脂肪干细胞的提取与鉴定 | 第42-44页 |
| 5.2 GDF11对脂肪干细胞增殖的影响 | 第44-45页 |
| 5.3 GDF11对脂肪干细胞中脂滴形成的影响 | 第45-46页 |
| 5.4 GDF11对脂肪分化相关基因的影响 | 第46-47页 |
| 6 讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 GDF11对脂肪代谢的影响 | 第48-55页 |
| 1 引言 | 第48页 |
| 2 实验材料 | 第48-49页 |
| 2.1 脂肪细胞 | 第48页 |
| 2.2 实验仪器 | 第48-49页 |
| 2.3 主要试剂 | 第49页 |
| 3 实验方法 | 第49-50页 |
| 3.1 油红O染色 | 第49页 |
| 3.2 q-PCR | 第49页 |
| 3.3 Westernblotting | 第49页 |
| 3.4 甘油检测 | 第49-50页 |
| 3.5 甘油三酯检测 | 第50页 |
| 3.6 统计分析 | 第50页 |
| 4 实验结果 | 第50-54页 |
| 4.1 脂肪细胞 | 第50-51页 |
| 4.2 GDF11减少脂肪细胞中甘油三酯的积累并促进脂肪分解 | 第51-52页 |
| 4.3 GDF11对脂肪代谢相关基因或蛋白表达的影响 | 第52-53页 |
| 4.4 GDF11通过PKA和BMP信号通路促进脂肪细胞中的脂肪分解代谢 | 第53-54页 |
| 5 讨论 | 第54-55页 |
| 第五章 结论及展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录 | 第60-62页 |
| 硕士期间主要成果 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
