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生长分化因子11对脂肪干细胞成脂分化及脂肪代谢的影响

摘要第3-4页
Abstract第4页
英文缩写词第5-10页
第一章 前言第10-20页
    1 脂肪干细胞第10-12页
    2 脂肪代谢第12-14页
        2.1 ATGL:脂肪分解的初始步骤第13页
        2.2 HSL:主要的DG脂肪酶第13页
        2.3 MGL:脂肪分解的最后一步第13页
        2.4 脂滴相关蛋白在脂解中的作用第13-14页
    3 生长分化因子11(GDF11)第14-18页
        3.1 GDF11的结构第14-15页
        3.2 GDF11的表达和分布第15-16页
        3.3 GDF11的信号通路第16页
        3.4 GDF11的功能第16-18页
            3.4.1 GDF11在肌肉组织发育中的作用第16页
            3.4.2 GDF11在神经系统发育中的作用第16-17页
            3.4.3 GDF11在消化腺发育中的作用第17页
            3.4.4 GDF11在泌尿生殖系统发育中的作用第17页
            3.4.5 GDF11在骨骼发育中的作用第17-18页
            3.4.6 GDF11在抗衰老与心血管疾病中的作用第18页
    4 研究意义第18-19页
    5 技术路线第19-20页
第二章 GDF11的表达及纯化第20-34页
    1 引言第20页
    2 实验材料第20-22页
        2.1 实验菌株、细胞与质粒第20页
        2.2 仪器与设备第20-21页
        2.3 主要试剂第21-22页
        2.4 本章所需核酸片段与引物序列第22页
    3 主要试剂配方第22-23页
    4 实验方法第23-30页
        4.1 质粒提取第23-24页
        4.2 感受态细菌的制备及转化第24页
        4.3 PCR扩增目的片段第24-25页
        4.4 琼脂糖核酸电泳第25页
        4.5 胶回收第25-26页
        4.6 目的片段和质粒的双酶切以及连接第26-27页
        4.7 重组质粒的鉴定第27页
        4.8 CHO细胞培养与转染第27-28页
        4.9 转染子鉴定第28-29页
        4.10 GDF11蛋白的表达鉴定与纯化第29页
        4.11 GDF11活性鉴定第29-30页
    5 实验结果第30-33页
        5.1 pcDNA3.1~+-KSH-DHFR重组质粒的构建第30-31页
        5.2 pcDNA3.1~+-KSH-DHFR-GDF11重组质粒的构建第31-32页
        5.3 转染和筛选稳定的转染子以及GDF11蛋白的表达纯化第32-33页
        5.4 GDF11蛋白活性鉴定第33页
    6 讨论第33-34页
第三章 GDF11对脂肪干细胞增殖和成脂分化的影响第34-48页
    1 引言第34页
    2 实验材料第34-36页
        2.1 细胞第34页
        2.2 仪器与设备第34页
        2.3 主要试剂第34-35页
        2.4 本章所涉及相关基因的引物第35-36页
    3 主要试剂配方第36页
    4 实验方法第36-42页
        4.1 脂肪干细胞的分离提取第36-37页
        4.2 脂肪干细胞鉴定第37-38页
        4.3 细胞冻存第38页
        4.4 细胞复苏与培养第38页
        4.5 细胞传代或铺板第38页
        4.6 脂肪干细胞增殖实验第38页
        4.7 脂肪干细胞周期检测第38-39页
        4.8 脂肪干细胞成脂分化第39页
        4.9 油红O染色第39页
        4.10 茜素红染色第39-40页
        4.11 甲苯胺蓝染色第40页
        4.12 RNA提取与q-PCR第40页
        4.13 细胞总蛋白质的抽提第40-41页
        4.14 蛋白质浓度的测定及调整第41页
        4.15 Westernblotting第41-42页
        4.16 统计分析第42页
    5 实验结果第42-47页
        5.1 脂肪干细胞的提取与鉴定第42-44页
        5.2 GDF11对脂肪干细胞增殖的影响第44-45页
        5.3 GDF11对脂肪干细胞中脂滴形成的影响第45-46页
        5.4 GDF11对脂肪分化相关基因的影响第46-47页
    6 讨论第47-48页
第四章 GDF11对脂肪代谢的影响第48-55页
    1 引言第48页
    2 实验材料第48-49页
        2.1 脂肪细胞第48页
        2.2 实验仪器第48-49页
        2.3 主要试剂第49页
    3 实验方法第49-50页
        3.1 油红O染色第49页
        3.2 q-PCR第49页
        3.3 Westernblotting第49页
        3.4 甘油检测第49-50页
        3.5 甘油三酯检测第50页
        3.6 统计分析第50页
    4 实验结果第50-54页
        4.1 脂肪细胞第50-51页
        4.2 GDF11减少脂肪细胞中甘油三酯的积累并促进脂肪分解第51-52页
        4.3 GDF11对脂肪代谢相关基因或蛋白表达的影响第52-53页
        4.4 GDF11通过PKA和BMP信号通路促进脂肪细胞中的脂肪分解代谢第53-54页
    5 讨论第54-55页
第五章 结论及展望第55-56页
参考文献第56-60页
附录第60-62页
硕士期间主要成果第62-63页
致谢第63页

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