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FoxO1调控猪骨骼肌纤维类型分化的作用及分子机理

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-14页
第一部分 文献综述第14-34页
 第一章 肌纤维的特性、构成肌纤维的蛋白亚型及肉品质第14-23页
   ·肌纤维特性第15-18页
     ·肌纤维第15页
     ·肌纤维类型的分类方法第15-16页
     ·肌纤维类型的特征第16页
     ·影响组织化学特性的因素第16-18页
   ·肌球蛋白和其他肌纤维蛋白亚型的多样性第18-23页
     ·肌球蛋白亚型第18-19页
     ·其他蛋白亚型第19-20页
     ·肌纤维的蛋白亚型和肌纤维类型的关系第20-21页
     ·肌纤维类型,MyHC 亚型和肉质第21-23页
 第二章 调控肌纤维类型的关键信号分子第23-26页
   ·MRFs第23页
   ·PGC-1s第23-24页
   ·PPARs第24页
   ·CaN第24页
   ·MEF2第24-25页
   ·NFAT第25页
   ·FoxO1第25-26页
 第三章 FoxO 蛋白家族介绍第26-34页
   ·FoxO 的结构特点第26-27页
     ·Fox 的命名与分类第26-27页
     ·FoxO1 的结构特点及染色体定位第27页
   ·FoxO1 转录活性的调节第27-34页
     ·磷酸化/去磷酸化第28页
     ·乙酰化/去乙酰化第28-29页
     ·蛋白之间的互作第29-34页
第二部分 实验研究第34-61页
 第四章 猪骨骼肌中FoxO1 与MyHCs 的相关性研究第34-41页
   ·材料与方法第34-36页
     ·实验动物第34-35页
     ·主要仪器和试剂第35页
     ·real-time RT-PCR 分析第35页
     ·Western blotting 检测第35-36页
     ·免疫组织化学检测第36页
     ·统计学分析第36页
   ·结果与分析第36-39页
     ·猪比目鱼肌和趾长伸肌的组织结构特点第36页
     ·猪比目鱼肌和趾长伸肌中FoxO1 的表达情况第36-38页
     ·猪比目鱼肌和趾长伸肌中MyHCsmRNA 的表达情况第38-39页
     ·猪骨骼肌中FoxO1 与MyHCs 的相关性分析第39页
   ·讨论第39-40页
   ·小结第40-41页
 第五章 FoxO1 脱磷酸化对猪骨骼肌卫星细胞分化及肌纤维类型组成的影响第41-48页
   ·材料与方法第41-42页
     ·主要材料第41页
     ·Wortmannin 处理猪骨骼肌卫星细胞第41页
     ·细胞免疫化学染色检测第41页
     ·Western blotting 分析第41页
     ·real-time RT- PCR 分析第41-42页
     ·统计学分析第42页
   ·结果与分析第42-46页
     ·猪骨骼肌卫星细胞细胞分化过程中形态学变化第42-43页
     ·WM 对FoxO1 磷酸化水平的影响第43-44页
     ·FoxO1 去磷酸化后对骨骼肌卫星细胞分化的影响第44页
     ·FoxO1 去磷酸化后对骨骼肌卫星细胞分化标志基因表达的影响第44-45页
     ·FoxO1 去磷酸化对猪成肌细胞MyHCs 基因表达的影响第45页
     ·FoxO1 去磷酸化对氧化型肌纤维相关基因的影响第45-46页
   ·讨论第46-47页
   ·小结第47-48页
 第六章 猪FoxO1 基因shRNA 慢病毒包装与干扰效率检测第48-53页
   ·材料与方法第48-49页
     ·主要试剂与细胞系第48页
     ·慢病毒包装与病毒滴度测定第48页
     ·重组慢病毒感染猪骨骼肌卫星细胞第48页
     ·real-time RT-PCR 检测第48页
     ·Western blotting 分析第48-49页
     ·统计学分析第49页
   ·结果与分析第49-51页
     ·慢病毒载体包装第49页
     ·病毒滴度测定第49页
     ·重组慢病毒感染猪骨骼肌卫星细胞的效率第49-50页
     ·重组慢病毒感染猪骨骼肌卫星细胞后对FoxO1 表达的影响第50-51页
   ·讨论第51-52页
   ·小结第52-53页
 第七章 干扰FoxO1 对猪骨骼肌卫星细胞分化及肌纤维类型组成的影响第53-56页
   ·材料与方法第53页
     ·主要材料第53页
     ·细胞免疫化学染色检测第53页
     ·real-time RT-PCR第53页
     ·Western blotting 分析第53页
     ·统计学分析第53页
   ·结果与分析第53-55页
     ·干扰FoxO1 对猪骨骼肌卫星细胞分化的影响第53-54页
     ·干扰FoxO1 对MyHCs 表达的影响第54-55页
     ·干扰 FoxO1 对肌纤维类型相关基因表达的影响第55页
   ·讨论第55页
   ·小结第55-56页
 第八章 FoxO1 调控猪骨骼肌纤维类型的作用机理研究第56-61页
   ·材料与方法第56-57页
     ·主要材料第56页
     ·CsA 处理猪骨骼肌卫星细胞第56页
     ·CaN 酶活性测定第56页
     ·细胞免疫化学分析第56页
     ·real-time RT-PCR 分析第56页
     ·Western blotting 分析第56页
     ·统计学分析第56-57页
   ·结果与分析第57-59页
     ·CsA 对CaN/NFAT 的抑制作用第57页
     ·阻断CaN 抑制猪骨骼肌卫星细胞分化及MyHCs 的比例第57-58页
     ·干扰FoxO1 削弱了CsA 对氧化型肌纤维形成的抑制作用第58-59页
     ·FoxO1 对CaN/NFAT 信号通路的影响第59页
   ·讨论第59-60页
   ·小结第60-61页
结论第61-62页
创新点第62-63页
进一步研究内容第63-64页
参考文献第64-80页
附录第80-92页
缩略词表第92-94页
致谢第94-95页
作者简介第95-97页

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