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ISO与TNFα对猪ATGL的表达调控及脂解分子机制研究

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-14页
第一章 脂肪分解作用研究进展第14-27页
   ·参与脂解作用的重要脂酶第14-18页
     ·激素敏感脂酶第14-16页
     ·ATGL第16-17页
     ·单酰甘油脂酶第17页
     ·其他脂酶第17-18页
   ·脂滴相关蛋白和脂质结合蛋白第18-22页
     ·Perilipins第18-19页
     ·小窝蛋白第19-20页
     ·与HSL 相互作用的蛋白第20页
     ·与ATGL 相互作用蛋白第20-21页
     ·水通道蛋白第21页
     ·CIDEs 家族第21-22页
   ·激素调控脂解作用机制第22-26页
     ·腺苷酸环化酶和G 蛋白偶联受体第22-23页
     ·尿钠肽通路第23-24页
     ·受体酪氨酸激酶信号通路第24-25页
     ·其他脂解通路第25-26页
   ·脂质代谢研究方法第26-27页
第二章 ATGL 研究进展第27-38页
   ·ATGL 基因、m RNA 和蛋白结构第27-29页
   ·ATGL 生理功能第29-30页
   ·ATGL 的表达与调控第30-33页
     ·激素和细胞因子对ATGL 的调控第30-32页
     ·脂滴蛋白(lipid droplet proteins)第32-33页
   ·人类ATGL 或CGI-58 突变疾病第33-35页
     ·ATGL 基因突变体第33-34页
     ·CGI-58 基因突变体第34-35页
   ·ATGL/CGI58 组织特异性作用第35-38页
     ·心肌(Cardiac muscle)第35-36页
     ·骨骼肌(Sketetal muscle)第36页
     ·其他组织(Otheret issues)第36-38页
实验研究第38-67页
 第三章 异丙肾上腺素调控ATGL 表达研究第39-46页
   ·材料与方法第39-40页
     ·实验动物第39页
     ·试剂第39页
     ·实验仪器与器械第39页
     ·猪原代脂肪细胞的培养第39-40页
     ·主要试剂配制第40页
     ·培养液中甘油含量测定第40页
     ·Western blot 检测ATGL 蛋白的表达第40页
     ·RT-PCR 检测ATGL mRNA 的表达第40页
     ·数据统计分析第40页
   ·结果第40-43页
     ·ISO 对猪脂肪细胞脂肪分解作用的影响第40页
     ·不同浓度ISO 对猪脂肪细胞ATGL mRNA 和蛋白表达的影响第40-42页
     ·不同时间ISO 对猪脂肪细胞ATGL mRNA 和蛋白表达的影响第42页
     ·PKA 抑制剂对ISO 作用的ATGL mRNA 和蛋白表达的影响第42-43页
   ·讨论第43-45页
   ·小结第45-46页
 第四章 TNFα调控ATGL 表达研究第46-52页
   ·材料与方法第46-47页
     ·实验动物第46页
     ·试剂第46页
     ·实验仪器与器械第46页
     ·猪原代脂肪细胞的培养第46页
     ·主要试剂配制第46-47页
     ·培养液中甘油含量测定第47页
     ·RT-PCR 检测ATGL mRNA 的表达第47页
     ·数据分析第47页
   ·结果第47-50页
     ·TNFα对猪脂肪细胞甘油释放量的影响第47-48页
     ·不同浓度TNFα对猪脂肪细胞ATGL mRNA 表达的影响第48页
     ·TNFα不同处理时间对猪脂肪细胞ATGL m RNA 表达的影响第48-49页
     ·p38 MAPK 和 p42/44 MAPK 通路抑制剂对 TNFα 刺激的 ATGL mRNA 表达的影响第49-50页
   ·讨论第50-51页
   ·小结第51-52页
 第五章 猪ATGL 基因干扰载体构建第52-59页
   ·实验材料与方法第52-55页
     ·实验材料第52页
     ·实验方法第52-55页
   ·结果第55-57页
     ·重组克隆载体的构建与鉴定第55-56页
     ·慢病毒载体的包装及滴度测定第56页
     ·LentiH1-ATGL siRNA 感染猪成熟脂肪细胞对ATGL 和HSL mRNA 和蛋白表达的影响第56-57页
   ·讨论第57-58页
   ·小结第58-59页
 第六章 ATGL 在猪脂肪细胞中脂解作用及机理研究第59-67页
   ·实验材料与方法第59-60页
     ·实验动物第59页
     ·试剂第59页
     ·实验仪器与器械第59页
     ·猪原代脂肪细胞的培养第59-60页
     ·培养液中甘油含量测定第60页
     ·培养液中游离脂肪酸含量的测定第60页
     ·ATGL 和CGI-58 的免疫荧光化学染色第60页
     ·免疫共沉淀分析ATGL、CGI-58 和perilipin 间的相互作用第60页
   ·结果第60-64页
     ·干扰 ATGL 表达抑制猪脂肪细胞基础脂肪分解作用第60-61页
     ·干扰 ATGL 表达抑制异丙肾上腺素刺激的脂肪分解作用第61-62页
     ·干扰 ATGL 表达抑制TNFα刺激的脂肪分解作用第62页
     ·ATGL 和CGI-58 在脂肪细胞中的定位第62-63页
     ·异丙肾上腺素促进ATGL 与CGI-58 的结合第63-64页
   ·讨论第64-66页
   ·小结第66-67页
结论第67-68页
创新点第68-69页
进一步研究的内容第69-70页
参考文献第70-85页
附录第85-99页
致谢第99-100页
作者简介第100页

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