| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 5-羟甲基糠醛 | 第13-17页 |
| 1.1.1 5-羟甲基糠醛概述 | 第13页 |
| 1.1.2 5-HMF 的安全性评价 | 第13-14页 |
| 1.1.3 5-HMF 的生物活性 | 第14-17页 |
| 1.2 体外抗氧化模型 | 第17-18页 |
| 1.2.1 清除自由基 | 第17页 |
| 1.2.1.1 ABTS 法 | 第17页 |
| 1.2.1.2 DPPH 法 | 第17页 |
| 1.2.2 抗氧化的细胞模型 | 第17-18页 |
| 1.3 细胞凋亡及其分子机制 | 第18-22页 |
| 1.3.1 Caspase 家族对细胞凋亡的调控 | 第18-20页 |
| 1.3.1.1 Caspase 家族 | 第18-19页 |
| 1.3.1.2 外源性途径 | 第19页 |
| 1.3.1.3 内源性途径 | 第19-20页 |
| 1.3.2 Bcl-2 家族对细胞凋亡中线粒体的调控 | 第20页 |
| 1.3.3 P53 对细胞凋亡的调节 | 第20-21页 |
| 1.3.4 PI3K/AKT 信号通路对细胞凋亡的调节 | 第21-22页 |
| 1.3.5 MAPKs 信号通路对细胞凋亡的调节 | 第22页 |
| 1.4 细胞周期调控 | 第22-23页 |
| 1.5 本课题的研究意义和研究内容 | 第23-25页 |
| 1.5.1 本课题的研究意义 | 第23页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 5-HMF 的抗氧化活性评价 | 第25-37页 |
| 2.1 前言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料与设备 | 第25-26页 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.2 实验仪器与设备 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-29页 |
| 2.3.1 ABTS~+自由基清除实验 | 第26-27页 |
| 2.3.2 DPPH~+自由基清除实验 | 第27页 |
| 2.3.3 溶血实验 | 第27-29页 |
| 2.3.3.1 红细胞悬液的制备 | 第27页 |
| 2.3.3.2 AAPH 诱导的红细胞氧化损伤模型的建立 | 第27-28页 |
| 2.3.3.3 5-HMF 对红细胞氧化损伤的保护作用 | 第28页 |
| 2.3.3.4 原子力显微镜（AFM）观察红细胞的形貌 | 第28页 |
| 2.3.3.5 红细胞氧化损伤指标的测定 | 第28-29页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第29-35页 |
| 2.4.1 5-HMF 对 ABTS~+自由基的清除能力 | 第29页 |
| 2.4.2 5-HMF 对 DPPH~+自由基的清除能力 | 第29-30页 |
| 2.4.3 溶血实验 | 第30-35页 |
| 2.4.3.1 AAPH 诱导红细胞氧化损伤模型的条件优化 | 第30-31页 |
| 2.4.3.2 5-HMF 对红细胞氧化损伤的保护作用 | 第31-32页 |
| 2.4.3.3 原子力显微镜（AFM）观察红细胞的形貌 | 第32-33页 |
| 2.4.3.4 红细胞氧化损伤指标的测定 | 第33-35页 |
| 2.5 本章小结 | 第35-37页 |
| 第三章 5-HMF 的抗肿瘤活性的初步探讨 | 第37-49页 |
| 3.1 前言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料与设备 | 第37-39页 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 | 第37-38页 |
| 3.2.2 实验仪器与设备 | 第38-39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-43页 |
| 3.3.1 细胞复苏 | 第39页 |
| 3.3.2 细胞传代 | 第39-40页 |
| 3.3.3 细胞冻存 | 第40页 |
| 3.3.4 细胞存活率检测及形态学观察 | 第40-41页 |
| 3.3.5 流式细胞分析 | 第41-42页 |
| 3.3.5.1 PI 单染法 | 第41页 |
| 3.3.5.2 Annexin-V/PI 双染法 | 第41-42页 |
| 3.3.6 TUNEL-DAPI 双染 | 第42页 |
| 3.3.7 细胞内 ROS 的检测 | 第42-43页 |
| 3.3.7.1 ROS 含量的检测 | 第42-43页 |
| 3.3.7.2 荧光显微镜观察 | 第43页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第43-48页 |
| 3.4.1 5-HMF 抑制人体细胞增殖的能力 | 第43-44页 |
| 3.4.2 5-HMF 对 A375 细胞存活率及形态学影响 | 第44-45页 |
| 3.4.3 流式细胞分析 | 第45-46页 |
| 3.4.3.1 PI 单染分析 | 第45页 |
| 3.4.3.2 Annexin-V/PI 双染分析 | 第45-46页 |
| 3.4.4 TUNEL-DAPI 双染分析 | 第46-47页 |
| 3.4.5 细胞内 ROS 水平的检测 | 第47-48页 |
| 3.5 本章小结 | 第48-49页 |
| 第四章 5-HMF 抑制 A375 细胞增殖中相关蛋白活性及表达水平 | 第49-64页 |
| 4.1 前言 | 第49页 |
| 4.2 实验材料与设备 | 第49-51页 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 | 第49-51页 |
| 4.2.2 实验仪器与设备 | 第51页 |
| 4.3 实验方法 | 第51-54页 |
| 4.3.1 Caspase 活性的检测 | 第51-52页 |
| 4.3.1.1 总 BCA 浓度的检测 | 第51页 |
| 4.3.1.2 Caspase 活性的检测 | 第51-52页 |
| 4.3.2 Western blotting 法检测细胞内凋亡相关基因的表达水平 | 第52-53页 |
| 4.3.2.1 SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第52-53页 |
| 4.3.2.2 转膜 | 第53页 |
| 4.3.2.3 抗体孵育 | 第53页 |
| 4.3.2.4 显色反应 | 第53页 |
| 4.3.3 5-HMF 诱导 A375 细胞凋亡的主要通路的验证 | 第53-54页 |
| 4.3.3.1 抑制剂预处理对 A375 细胞存活率的影响 | 第54页 |
| 4.3.3.2 抑制剂预处理对 A375 细胞周期的影响 | 第54页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第54-63页 |
| 4.4.1 5-HMF 通过调控 Caspase 家族蛋白诱导 A375 细胞凋亡 | 第54-55页 |
| 4.4.2 5-HMF 诱导 A375 细胞凋亡时线粒体途径中相关蛋白的表达情况 | 第55-56页 |
| 4.4.3 5-HMF 诱导 DNA 损伤介导的 P53 磷酸化 | 第56-57页 |
| 4.4.4 5-HMF 对磷酸化 AKT 蛋白表达量的影响 | 第57-58页 |
| 4.4.5 5-HMF 对 MAPKs 蛋白表达量的影响 | 第58-59页 |
| 4.4.6 5-HMF 诱导 A375 细胞 G0/G1 期阻滞中相关因子的调控 | 第59-60页 |
| 4.4.7 抑制剂预处理对 5-HMF 诱导 A375 细胞凋亡的影响 | 第60-62页 |
| 4.4.8 5-HMF 抑制 A375 细胞增殖的信号转导通路 | 第62-63页 |
| 4.5 本章小结 | 第63-64页 |
| 结论与展望 | 第64-66页 |
| 一、结论 | 第64-65页 |
| 二、本课题主要创新点 | 第65页 |
| 三、展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-80页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 附件 | 第82页 |
