| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 英文缩略词表 | 第10-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-14页 |
| 第2章 材料和方法 | 第14-31页 |
| 2.1 材料 | 第14-17页 |
| 2.1.1 石蜡组织标本 | 第14页 |
| 2.1.2 细胞 | 第14页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第14-15页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第15-17页 |
| 2.2 方法 | 第17-18页 |
| 2.2.1 免疫组织化学技术分析原发性肝癌及癌旁 Notch3 蛋白表达情况 | 第17-18页 |
| 2.3 溶液配制 | 第18-21页 |
| 2.3.1 PBS 缓冲液 | 第18页 |
| 2.3.2 0.1%DEPC 水 | 第18-19页 |
| 2.3.3 75%酒精 | 第19页 |
| 2.3.4 10%SDS | 第19页 |
| 2.3.5 30%聚丙烯酰胺凝胶贮存液 | 第19页 |
| 2.3.6 10% AP | 第19页 |
| 2.3.7 0.5 mol/L Tris·HCl(pH6.8) | 第19页 |
| 2.3.8 1.0 mol/L Tris·HCl(pH7.5) | 第19页 |
| 2.3.9 1.5 mol/L Tris·HCl(pH8.8) | 第19页 |
| 2.3.10 5×电泳上样缓冲液 | 第19页 |
| 2.3.11 5×电泳缓冲液 | 第19-20页 |
| 2.3.12 0.05%考马斯亮蓝染液 | 第20页 |
| 2.3.13 2×电转缓冲液 | 第20页 |
| 2.3.14 脱色液 | 第20页 |
| 2.3.15 10×TBS | 第20页 |
| 2.3.16 TBST | 第20页 |
| 2.3.17 5%封闭液 | 第20页 |
| 2.3.18 TE(PH8.0) | 第20页 |
| 2.3.19 50×TAE | 第20-21页 |
| 2.3.20 10 mg/mL EB | 第21页 |
| 2.3.21 琼脂糖凝胶 | 第21页 |
| 2.4 细胞培养 | 第21-22页 |
| 2.4.1 HepG2 细胞的培养条件 | 第21页 |
| 2.4.2 细胞复苏 | 第21页 |
| 2.4.3 细胞传代 | 第21-22页 |
| 2.4.4 细胞冻存 | 第22页 |
| 2.5 转染 | 第22-23页 |
| 2.6 流式细胞术检测 HEPG2 细胞凋亡率 | 第23页 |
| 2.7 MTS 比色法检测 HEPG2 细胞增殖活性 | 第23页 |
| 2.8 HOECHST 33342 染色观察 HEPG2 细胞凋亡情况 | 第23-24页 |
| 2.9 RT-QPCR 分析 HEPG2 细胞中 MIRNA-206、NOTCH3 、BAX、BCL-2、HES1、P57 和 MMP-9 基因的表达 | 第24-26页 |
| 2.9.1 提取肿瘤细胞总 RNA | 第24页 |
| 2.9.2 检测细胞总 RNA 的质量与浓度 | 第24页 |
| 2.9.3 逆转录合成 cDNA | 第24-25页 |
| 2.9.4 RT-qPCR | 第25-26页 |
| 2.10 WESTERN BLOTTING 分析 HEPG2 细胞中分析 NOTCH3 、BAX、BCL-2、CASPASE-3、 HES1、P57 和 MMP-9 的表达 | 第26-29页 |
| 2.10.1 提取细胞总蛋白 | 第26页 |
| 2.10.2 测定细胞总蛋白浓度 | 第26-27页 |
| 2.10.3 SDS-PAGE 电泳 | 第27页 |
| 2.10.4 转膜 | 第27-28页 |
| 2.10.5 免疫反应 | 第28页 |
| 2.10.6 化学发光 | 第28-29页 |
| 2.10.7 半定量分析 | 第29页 |
| 2.11 流式细胞术检测 HEPG2 细胞周期分布 | 第29页 |
| 2.12 伤口愈合实验检测 HEPG2 细胞迁移情况 | 第29-30页 |
| 2.13 统计学处理 | 第30-31页 |
| 第3章 结果 | 第31-39页 |
| 3.1 NOTCH3 在肝癌和癌旁组织的差异表达 | 第31页 |
| 3.2 荧光显微镜观察 HEPG2 细胞转染情况 | 第31页 |
| 3.3 高表达 MIR-206 抑制 HEPG2 细胞的增殖活性 | 第31-32页 |
| 3.4 高表达 MIR-206 促进 HEPG2 细胞凋亡 | 第32-33页 |
| 3.4.1 Hoechst 33342 荧光染色观察 HepG2 细胞凋亡情况 | 第32页 |
| 3.4.2 流式细胞仪检测 HepG2 细胞凋亡率 | 第32-33页 |
| 3.5 高表达 MIRNA-206 基因诱导 HEPG2 细胞周期阻滞 | 第33页 |
| 3.6 高表达 MIRNA-206 基因抑制 HEPG2 细胞迁移 | 第33-34页 |
| 3.7 高表达 MIRNA-206 基因对 HEPG2 细胞中 MIRNA-206、NOTCH3、BAX、BCL-2、HES1、P57、CASPASE-3 和 MMP-9 基因表达的影响 | 第34-39页 |
| 3.7.1 总 RNA 样品的质量与纯度 | 第34页 |
| 3.7.2 高表达 miRNA-206 基因下调 Notch3 、Bcl-2、Hes1、MMP-9 mRNA 的表达和上调 Bax、P57 mRNA 的表达 | 第34页 |
| 3.7.3 高表达 miRNA-206 基因下调 Notch3 、Bcl-2、Hes1、MMP-9 蛋白的表达和上调 Bax、P57、Caspase-3 蛋白的表达 | 第34-39页 |
| 第4章 讨论 | 第39-42页 |
| 第5章 结论与展望 | 第42-44页 |
| 5.1 结论 | 第42页 |
| 5.2 进一步工作的方向 | 第42-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第48-49页 |
| 综述 | 第49-60页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
